Тема 30. Возбудители эшерихиозов

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителей эшерихиозов и методы бактериологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы таблицы по морфологическим и культуральным свойствам кишечной палочки и биопрепараты. Для приготовления препаратов – мазков-отпечатков – суточные культуры кишечной палочки, реактивы для окрашивания их по Граму, среда Эндо, среда Левина, среда Гисса, кровяной МПА, пробирки со взвесью культур кишечной палочки, диагностические агглютинирующие сыворотки для серо-групповой типизации кишечной палочки.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Кишечная палочка, ее морфологические и культуральные свойства, ее роль в возникновении кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных.

2. Схема бактериологического исследования материала на эшерихиоз.

1. Классификация возбудителя

Сем: Enterobacteriaceae

Род: Escherichia

Вид: E. coli (энтеропатогенные штаммы)

2. Общая характеристика болезни:

Колибактериоз – острая инфекционная болезнь молодняка сельскохозяйственных животных, характеризующаяся главным образом диареей.

3. Восприимчивые животные:

- все виды сельскохозяйственных животных, включая птиц и пушных зверей, главным образом, молодняк;

- болеет человек.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- заражение происходит алиментарным путем, реже аэрогенным;

- возбудитель проникает в кровь, вызывает сепсис или размножается в кишечнике - энтеротоксическая или энтеритная формы;

- факторы вирулентности – возбудитель продуцирует термолабильный экзотоксин и термостабильные эндотоксины, гемолизины, обладает адгезией и др.

Методы диагностики (рис. 81)

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- при жизни - кал;

- посмертно – труп целиком, отрезок тонкого кишечника, брыжеечные лимфатические узлы, паренхиматозные органы, головной мозг.

2. Микроскопия:

а) методы окраски: простой метод, по Граму;

б) микрокартина: полиморфные палочки до 3 мкм, располагаются одиночно, реже попарно (рис. 82);

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

д) капсулу не образуют;

е) подвижны.

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические среды (среда Эндо, среда Левина и др.);

б) особенности выделения возбудителя:

- факультативные анаэробы;

Рис. 81. Схема лабораторной диагностики эшерихиоза (колибактериоза)

- оптимальная температура 37°С;

- срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

- на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка;

- на МПА – сочные, круглые, с ровными краями, серо-белого цвета колонии;

- на среде Эндо – ярко-красные колонии, на среде Левина – темно-фиолетовые или черные колонии (рис. 83).

Рис. 82. Возбудитель эшерихиоза (энтеропатогенные кишечные палочки) чистая агаровая культура. Увеличение х900

Рис. 83. Рост кишечных палочек на среде Левина. Колонии темно-фиолетовые или черные. Увеличение х2

г) биохимические свойства:

- обладают высокой сахаролитической активностью; для выявления проводят посевы на «цветной ряд» (среды Гисса);

- ферментируют с образованием кислоты и газа – глюкозу, лактозу, маннит, не расщепляют сахарозу;

- желатин не разжижают, сероводород не образуют, образуют индол, дают положительную реакцию с метиленовым красным (ярко-розового цвета), отрицательная реакция Фогес-Проскауэра;

д) биопроба

- внутримышечно заражают выделенной микробной культурой белых мышей и цыплят.

Б. Серологический метод:

- используют РА (пробирочная и на стекле) для серотипизации полученного антигена (микробной культуры) с поли- и моновалентными коли-сыворотками;

- используют реакцию иммунофлюоресценции.

В. Аллергический метод:

- не применяется.

4. Биопрепараты для специфической профилактики:

- инактивированная ГОА – формолтиомерсаловая вакцина (вводят стельным коровам, супоросным свиноматкам, суягным овцам);

- колипротектант ВИЭВ (взвесь убитой нагреванием культуры эшерихий, отмытой от токсинов и консервированной формалином).

5. Биопрепараты для специфической терапии:

- поливалентная гипериммунная сыворотка,

- коли-гертиеровский бактериофаг.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить морфологические, культуральные, биохимические свойства кишечной палочки.

2. Приготовить препараты-мазки из суточных культур кишечной палочки, окрасить по Граму и микроскопировать.

3. Изучить бактериологическую диагностику эшерихиоза сельскохозяйственных животных.

4. Приготовить препарат «висячая» капля из бульонной культуры кишечной палочки и провести микроскопию для установления подвижности.

5. Провести серотипизацию культуры кишечной палочки в РА с использованием поли- и моновалентных коли-сывороток.