Тема 31. Возбудители сальмонеллезов

ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить возбудителей сальмонеллезов и методы их бактериологической диагностики.

МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации таблица-схема проведения исследования на сальмонеллез, биопрепараты. Питательные среды: МПА, МПБ, Эндо, Плоскирева, Кларка и Симмонса, среда с лактозой, индикаторные среды для определения индола и сероводорода, диагностические агглютинирующие сыворотки для видовой дифференциации сальмонелл.

При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:

1. Виды сальмонелл, имеющие наибольшее значение в патологии животных.

2. Сальмонеллы, их морфологические и культуральные свойства, их роль в возникновении кишечных заболеваний у молодняка сельскохозяйственных животных.

3. Схема бактериологической диагностики болезней, вызванных сальмонеллами.

1. Классификация возбудителей

Сем: Enterobacteriaceae

Род: Salmonella

Виды сальмонелл, имеющих наибольшее значение в патологии животных:

1. S. enteritidis (dublin) - у телят.

2. S. choleraesuis (suipestifer)- у поросят.

3. S. typhisuis- у свиней.

4. S. typhimurium- у водоплавающей птицы.

5. S. abortus egui- аборт кобыл.

6. S. abortus ovis- у овец.

7. S. pullorum- у птиц.

2. Общая характеристика болезни:

Сальмонеллезы – группа инфекционных болезней преимущественно молодняка с.-х. животных и промысловых животных, характеризующихся при остром течений лихорадкой и профузным поносом, при хроническом – воспалением легких. У взрослых животных болезнь может протекать бессимптомно (сальмонеллоносительство), а у беременных самок возможны аборты. У человека могут возникать пищевые токсикоинфекции при употреблении продуктов, содержащих токсины сальмонелл.

3. Восприимчивые животные:

- все виды животных, особенно молодняк, включая птиц, промысловых животных и человека.

4. Патогенез и факторы вирулентности:

- Основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, возможно внутриутробное и трансовариальное.

- Размножаются в тонком кишечнике и гематогенным и лимфогенным путями разносятся в паренхиматозные органы, где вновь размножаются. При распаде их высвобождаются эндотоксины, которые вызывают патологические процессы.

- Сальмонеллы образуют два вида токсинов: экзо- и эндотоксины.

Методы диагностики (рис. 84)

А. Бактериологический метод:

1. Материал для исследования:

- при жизни – кал, сыворотка крови;

- посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентеральные лимфатические узлы, абортированный плод.

2. Микроскопия

а) методы окраски: простой метод, по Граму;

б) микрокартина: палочки с закругленными концами до 4 мкм, располагаются одиночно или попарно (рис. 85);

в) грамотрицательные;

г) спор не образуют;

Рис. 84. Схема лабораторной диагностики сальмонеллезов

Рис. 85. Возбудитель сальмонеллеза (чистая агаровая культура). Увеличение х900

д) капсулу не образуют;

е) подвижны (за исключением S. pullorum).

3. Культивирование:

а) посев на питательные среды: МПА, МПБ, дифференциально-диагностические – Эндо, Левина и др., накопительные.

б) особенности выделения возбудителя

- факультативные анаэробы;

- оптимальная температура 37°С;

- срок культивирования 18-20 ч.

в) культуральные свойства:

все сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки, близкие к эшерихиям:

- на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка,

- на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии,

- на среде Эндо – бесцветные или розоватые колонии, на среде Левина - светло-фиолетовые колонии.

После выделения чистой культуры лактозоотрицательных бактерий устанавливают их родовую принадлежность, затем дифференцируют до вида и сероварианта. С этой целью изучают их биохимические свойства и антигенное строение путем постановки пластинчатой реакции агглютинации (серологическая дифференциация).

г) биохимические свойства:

- обладают высокой сахаролитической активностью;

для установления родовой принадлежности проводят посевы на короткий «цветной ряд» (среды Гисса). При этом сальмонеллы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа, не расщепляют лактозу и сахарозу;

- дальнейшее изучение для установления видовой принадлежности проводят путем посевов на длинный «цветной ряд», в состав которого входят углеводы, и другие тесты;

- сальмонеллы не разжижают желатин, образуют сероводород, не образуют индол;

- дают положительную реакцию с метиловым красным: среда окрашивается в розово-красный цвет, отрицательную реакцию Фогеса-Проскауэра — желтое окрашивание среды.

д) биопроба:

- в необходимых случаях заражают подкожно белых мышей.

Б. Серологический метод:

- используют РА с сывороткой крови (кровью) при диагностике паратифозного аборта кобыл, поллуроза у кур;

- используют РА для дифференциации выделенной культуры сальмонелл с целью определения их вида и сероварианта;

- у сальмонелл различают соматический термостабильный О-антиген и жгутиковый термолабильный Н-антиген;

- культуру сальмонелл предварительно проверяют с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими О-сыворотками в РА на стекле. На основе общего для нескольких видов сальмонелл О-антигена они подразделяются на серологические группы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. При положительном результате с групповой сывороткой проводят испытания той же культуры, выросшей на скошенном МПА с отдельными монорецепторными О-сыворотками, входящими в смесь поливалентной сыворотки. Затем эти же культуры испытывают с монорецепторными Н-сыворотками, 1-й и 2-й фазы, обозначенными цифрами и малыми буквами;

- используют реакцию иммунофлуоресценции (РИФ).

В. Аллергический метод:

- не применяется.

4. Биопрепараты для специфической профилактики:

- инактивировшная концентрированная формолвакцина против паратифа телят и поросят;

- живая вакцина против паратифа свиней из штамма ТС-177.

5. Биопрепараты для специфической терапии:

- поливалентная антитоксическая сыворотка против паратифа и колибактериоза в двух вариантах:

а) для телят, ягнят, овец и птиц;

б) для телят, поросят, ягнят, овец и птиц:

- бактериофаг против паратифа и колибактериоза телят

- бактериофаг против пуллороза – тифа птиц.

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить культуральные свойства сальмонеллы на обычных и дифференциально-диагностических средах.

2. Приготовить препараты-мазки из суточных культур сальмонелл, окрасить их по Граму и провести микроскопирование.

3. Приготовить препараты «висячая» капля из суточной культуры сальмонелл и исследовать на подвижность.

4. Приготовить препарат-отпечаток из органов белой мыши, павшей от сальмонелл, окрасить по Граму, провести микроскопию.

5. Изучить биохимические свойства сальмонелл на средах «короткого» и «длинного» цветного ряда.

6. Провести видовую дифференциацию сальмонелл в РА с поливалентными и монорецепторными сыворотками.