21.2. Реакция диск-преципитации
Эта реакция используется при диагностике сибирской язвы и дифференциации ее возбудителя от подобных ему сапрофитных микробов рода бациллус. Она основана на взаимодействии антигена – нативных продуктов метаболизма, растущего в жидкой питательной среде возбудителя сибирской язвы - с антителами преципитирующей сибиреязвенной сыворотки в слое агарового геля. При этом происходит образование диска преципитации в слое агарового геля, расположенного между антигеном и сывороткой.
Для постановки реакции диск-преципитации необходимы следующие компоненты:
1) преципитирующая сибиреязвенная сыворотка;
2) очищенный 1%-ный агаровый гель;
3) жидкая питательная среда для возбудителя сибирской язвы.
Техника проведения реакции диск-преципитации сводится к следующему. Преципитирующую сибиреязвенную сыворотку разливают по 0,5-1 мл в стерильные бактериологические пробирки. На поверхность сыворотки наслаивают расплавленный и охлажденный до 15°С 1%-ный агаровый гель столбиком высотой 5-7 мм. На поверхность застывшего агара вносят 1-1,5 мл жидкой питательной среды. При исследовании патологического материала и мяса вынужденно убитых животных посев производят в мясопептонный бульон.
Посевы выдерживают в термостате при 37° в течение 16-20 ч.
Учет результатов проводят визуально на темном фоне.
Возбудитель сибирской язвы образует в средней части столбика агарового геля тонкую с четкими границами белую линию (диск) преципитации.
Почвенные сибиреязвенные сапрофитные бациллы, за исключением нескольких штаммов Вас. anthracoides, дают отрицательный результат (диск преципитации отсутствует).
В качестве контроля при постановке реакции могут быть использованы посевы из противосибиреязвенной вакцины СТИ.
21.3. Реакция диффузионной преципитации (рдп)
Эта реакция нашла широкое применение при диагностике вирусных болезней, а также для определения титра преципитирующей сыворотки, для установления токсигенности некоторых видов микроорганизмов и др.
Техника проведения этой реакции сводится к следующему.
В стерильные чашки Петри разливают по 20-25 мл осветленного 1-1,5%-ного агара. После застывания агара в его слое делают лунки диаметром 5-6 мм в центре и на периферии на расстоянии 4-5 мм друг от друга. В каждую лунку вносят по одной капле агара для формирования дна лунки. Розлив компонентов реакции в лунки проводится различно в зависимости от поставленных целей.
Через 48 часов (24 часа инкубирования в термостате, 24 часа при комнатной температуре) проводится учет результатов реакции. За это время реагенты диффундируют в агар навстречу друг другу. При положительной реакции в месте встречи образуются полосы (дуги) – линии преципитации серо-белого цвета (рис. 62).
Рис. 62. Реакция диффузионной преципитации в агаровом геле
Эта реакция может быть осуществлена и микрометодом. В этом случае на предметных стеклах приготавливают слой агара, в котором делают лунки. В остальном эта реакция сходна с макрометодом.
Задания для самостоятельной работы
1. Провести постановку и учет результатов реакции кольцепреципитации методами «наслаивания» и «подслаивания».
2. Ознакомиться с результатами реакции диффузионной преципитации.
Вопросы дли самоподготовки и контроля знаний
1. Как называются компоненты в реакции преципитации?
1. Антитела.
2. Антиген.
3. Осадок, продукт соединения антигена с антителом.
А. Преципитат.
Б. Преципитиноген.
В.Преципитины.
2. Для постановки реакции преципитации используют метод наслаивания. Какова последовательность розлива компонентов при проведении реакции этим методом?
А. Антиген (экстракт), преципитирующая сыворотка.
Б. Преципитирующая сыворотка, антиген (экстракт).
3. Для постановки реакции преципитации используют метод подслаивания. Какова последовательность розлива компонентов при проведении реакции этим методом?
А. Антиген (экстракт), преципитирующая сыворотка.
Б. Преципитирующая сыворотка, антиген (экстракт).
4. Какие изменения претерпевает антиген под действием специфических антител в реакции преципитации?
А. Выпадает в осадок на границе обеих жидкостей.
Б. Склеивается.
В. Растворяется.
5. При постановке реакции преципитации проведен контроль: преципитирующая сыворотка и специфический антиген. Каков будет результат в этом контроле?
А. Отрицательный.
Б. Сомнительный.
В. Положительный.
6. При постановке реакции преципитации проведен контроль: нормальная сыворотка крови и специфический антиген. Каков будет результат в этом контроле?
А. Отрицательный.
Б. Сомнительный.
В. Положительный.