Тема 38. Возбудитель бруцеллеза
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ. Изучить свойства возбудителя и методы микробиологической диагностики бруцеллеза/
МАТЕРИАЛЬНОЕ ОСНАЩЕНИЕ. Для демонстрации необходимы схема микробиологической диагностики бруцеллеза, таблицы (морфология бруцелл), микроскопические препараты – мазки, окрашенные по методу Козловского и по Граму, пробирки с положительной и отрицательной кольцевой реакцией с молоком, биопрепараты, пробирки с культурой бруцелл (вакцинный штамм) на питательных средах (мясо-пептонный печеночный бульон – МППБ, мясо-пептонный печеночный глюкозо-глицериновый агар – МППГГА, МППБ и МППГГА с 10 % глюкозой и 2-3 % глицерином), труп морской свинки, павшей после заражения вакцинным штаммом бруцелл, бруцеллезная сыворотка, бруцеллезный антиген, взвесь бруцелл, кишечной палочки.
При подготовке к занятию необходимо уяснить следующие вопросы:
1. Виды возбудителя бруцеллеза, морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические особенности бруцелл.
2. Схема бактериологической диагностики бруцеллеза.
3. Серологическая диагностика бруцеллеза.
4. Специфическая профилактика бруцеллеза.
1. Классификация возбудителя
Род: Brucella
Виды: Вг. melitensis(овец и коз)
Вг. abortus (крупного рогатого скота)
Вг. suis (свиней)
Вг. suis (4 биовар) бруцеллез северных оленей
Вг. canis (собак)
Вг. ovis (инфекционного эпидидимита баранов)
Вг. neotomaе (кустарниковых крыс).
2. Общая характеристика болезни:
Бруцеллез – хроническая инфекционная болезнь, у животных протекает в скрытой форме, происходят массовые аборты, задержание последа, метриты и др.
3. Восприимчивые животные:
- многие виды с.-х. и диких животных, включая человека.
4. Патогенез и факторы вирулентности:
- возбудитель в организм проникает алиментарным и половым путями,
- бруцеллы вначале размножаются в ближайших лимфатических узлах, далее проникают во внутренние органы, инфекция принимает генерализованный характер. Наиболее благоприятную среду для размножения бруцеллы находят в беременной матке, что приводит к эндометриту, нарушению питания плода и аборту. Плодные оболочки многих животных содержат эритриол – фактор роста бруцелл,
- факторами вирулентности у бруцелл являются эндотоксины и ферменты патогенности — гиалуронидаза, каталаза, уреаза.
Методы диагностики (рис. 101):
А. Бактериологический метод:
1. Материал для исследования:
- абортированный плод с оболочками, желудок, печень, почки плода, молоко и др.
Рис. 101. Схема лабораторной диагностики бруцеллеза
2. Микроскопия:
а) методы окраски: по Граму, по Козловскому
окраска по Козловскому:
- 2%-ный раствор сафранина (при подогревании) – 2 мин;
- промыть водой;
- 2%-ный раствор малахитовой зелени – 2 мин.
Бруцеллы окрашиваются в красный цвет; ткани, форменные элементы, другие бактерии – в зеленый.
б) микрокартина: мелкие коккобактерии (0,3-0,6 мкм) или мелкие палочки (0,6-2,5 мкм), располагаются одиночно, парами и небольшими группами (рис 102);
в) грамотрицательные;
г) спор не образуют;
д) капсулу не образуют;
е) неподвижны.
3. Культивирование:
а) посев на питательные среды – мясо-пептонный печеночный бульон (МППБ), мясо-пептонный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (МППГГА), печеночно-глюкозо-глицериновый бульон и агар (МГГБ и МГГА) с 10%-ной глюкозой и 2-3%-ным глицерином.
б) особенности выделения возбудителя:
- микроаэрофилы;
- выращивают в атмосфере 10-15 % СО2 (Вг. abortus, Вг.ovis в первой генерации);
- остальные виды бруцелл – аэробы;
- оптимальная температура 37°С;
- срок культивирования от 15 до 30 дн.
в) культуральные свойства:
- на жидких средах – равномерное помутнение, пристеночное кольцо, незначительный осадок;
- на плотных средах – мелкие, прозрачные с ровным краем колонии.
г) биохимические свойства:
- сахаролитические свойства выражены слабо;
Рис. 102. Возбудитель бруцеллеза из чистой агаровой культуры. Увеличение, х900
- протеолитические свойства – молоко не свертывают, желатин не разжижают, сероводород образуют Вг.suis, в меньшей степени Вг.abortus
4. Биопроба:
- заражают подкожно морских свинок, белых мышей.
Дифференциацию проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, по бактериостатическому действию красок, РА и вирулентности.
Б. Серологический метод:
- используют РА, РСК, РДСК, РИД-ОПС (РИД с ОПС-антигеном), кольцевую пробу с молоком, Роз-Бенгал пробу.
В. Аллергический метод:
- для диагностики бруцеллеза у свиней используют аллерген бруцеллин ВИЭВ, который вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины,
- у животных, больных бруцеллезом, на месте введения аллергена развивается воспалительная реакция.
5. Биопрепараты для специфической профилактики:
- для крупного рогатого скота – живые вакцины из штамма 19 и штамма 82;
- для мелкого рогатого скота – живая вакцина из штамма 19.
6. Биопрепараты для специфической терапии:
- отсутствуют.
Задания для самостоятельной работы
1. Изучить культуральные особенности бруцелл на плотной и жидкой питательных средах. Сравнить культуральные свойства со свойствами других видов бактерий.
2. Приготовить препараты-мазки из органов морской свинки, зараженной вакцинным штаммом возбудителя бруцеллеза. Окрасить по Козловскому и провести микроскопию. Провести дифференциацию бруцеллы от других микроорганизмов.
3. Приготовить препараты из смешанной бактериальной культуры, окрасить по Граму.
4. Провести постановку пробирочной РА на бруцеллез с сывороткой крови крупного рогатого скота.
5. Провести постановку кольцевой пробы с молоком.