Самостоятельная работа студентов:
Зарисовать в тетради схему микробиологической диагностики дифтерии.
Микроскопическое изучение мазка из чистой культуры дифтерийной и ложнодифтерийной палочек. Окраска по Граму, Нейссеру.
Стерильным ватным тампоном произвести забор материала зева и носа с целью выявления дифтерийного бактерионосительства у студентов, затем произвести посев исследуемого материала на среду Леффлера.
Учет токсигенности культуры дифтерийной палочки в реакции преципитации в агаровом геле (демонстрация).
Изучение биохимических свойств культур дифтерийной и ложнодифтерийной палочек: проба на уреазу и цистиназу (демонстрация).
Изучить схему микробиологической диагностики коклюша.
Изучение препаратов для профилактики и терапии дифтерии и коклюша (противодифтерийная сыворотка, АД, АДС, АДСМ, АКДС).
Оформление протокола исследования.
|
Заключение |
Указания к самостоятельной работе:
Микробиологическая диагностика дифтерии:
а) бактериоскопический метод.
Микроскопическое изучение мазка, приготовленного из чистой культуры дифтерийной (ложнодифтерийной) палочки, окрашенного по Нейссеру, Граму.
При микроскопии мазка следует обратить внимание на следующие морфологические признаки:
- расположение палочек по отношению друг к другу;
- наличие зерен волютина и их расположение;
Для коринебактерий дифтерии характерно расположение палочек под углом друг к другу, в виде римской цифры V, кучки булавок, зерна волютина располагаются на концах палочек. Ложнодифтерийные палочки располагаются параллельно друг к другу, в виде “частокола”, у них отсутствуют зёрна волютина или содержат их по всей длине палочки.
б) Бактериологический метод
Для выявления дифтерийного бактерионосительства материал берут из зева и носа отдельными тампонами. Одним тампоном берут материал с миндалин, дужек мягкого нёба, другим- из носовых ходов. Посев производят на чашку Петри с кровяно- теллуритовым агаром, делят на две части: на одну половину производят посев материала из зева, на вторую половину- из носа. Чашки с посевом помещают в термостат при температуре 370 С на сутки.
В случае подозрительных колоний их отсевают для накопления и биохимической идентификации. При биохимической идентификации обращают внимание на пробы с уреазой и цистиназой, для этого производят пересев чистой культуры на среды с цистином и мочевиной.
Дифтерийная палочка дает положительную пробу на цистиназу: при посеве уколом на среду с цистином дает облаковидное почернение по ходу укола. Положительную пробу на уреазу дает ложнодифтерийная палочка. Проба на уреазу расценивается как положительная, если среда окрашивается в малиново- красный цвет. На средах Гисса биовар gravis расщепляет глюкозу и крахмал, биовар mitis- только глюкозу. А ложнодифтерийная палочка глюкозу и крахмал не ферментирует.
При идентификации необходимо определение токсигенности. Токсигенность определяется методом диффузионной преципитации в агаре. На среду, разлитую в чашки, накладывают фильтровальные бумажки, смоченные 0,25 мл антитоксической противодифтерийной сыворотки. Посев культуры производят в виде бляшек диаметром 0,7- 0,8 см с обеих сторон бумажки на расстояние 0,5 см от нее. С одной стороны наносится не более 5 культур (5 бляшек) в ряд. Посев испытуемых культур чередуется с посевом контрольного (токсигенного) штамма. Реакция основана на том, что антиген (экзотоксин) и антитело (антитоксическая сыворотка) обладают свойством в агаре диффундировать на встречу друг другу. На месте их соединения образуется линия преципитации («усики») если выделенная культура токсигенна, то образующаяся у нее линия преципитации сливается с линией преципитации контрольного штамма.
В последние годы для определения токсигенности применяют высокочувствительные методы- ИФА с моноклональными антителами, РНГА с антительным эритроцитарным дифтерийным диагностикумом.