Самостоятельная работа:

1. Зарисовать в тетради модель строения вириона, обозначить на рисунке НК, капсид, капсомеры, нуклеокапсид, суперкапсид.

2. Зарисовать в тетрадь схему строения куриного эмбриона.

3. Изучить способы заражения куриных эмбрионов, индикации вирусов в курином эмбрионе (реакция гемагглютнации) и идентификации (реакция торможения гемагглютинации - РТГА).

4. Пользуясь учебной таблицей, изобразите в виде схемы типы тканевых культур.

5. Изучить внутриклеточные включения (демострационный препарат и таблица). Зарисовать в тетради.

6. Зарисовать в тетради таблицу «Методы обнаружения вирусов в культуре ткани».

7. Посмотреть под микроскопом демонстрационный препарат культуры клеток.

Указания к самостоятельной работе

1. Культивирование вирусов в курином эмбрионе: существует несколько методов заражения куриных эмбрионов: на хорионаллантоисную оболочку, в аллантоисную полость, амниотическую полость, в желточный мешок. Для заражения используют эмбрионы 5- 11 дневного возраста. Перед заражением эмбрионы просматривают в темной комнате при помощи овоскопа для проверки их жизнеспособности, определения воздушной камеры и места расположения эмбриона.

Для заражения куриного эмбриона, например, в аллантоисную полость исследуемым вирусосодержащим материалом яйцо устанавливают в штативе в вертикальном положении тупым концом вверх. Скорлупу, над воздушной камерой обрабатывают спиртом, йодом, повторно спиртом и прокалывают над воздушной камерой и через небольшое отверстие вводят иглой шприца на глубину 1-1,5 см материал в объеме 0,1-0,2 мл. Отверстие заливают парафином. Зараженное яйцо ставят в термостат при 37° С на 48 часов.

Через несколько дней (2-3 дня) производят вскрытие куриных эмбрионов. Работу проводят в стерильных условиях. Яйцо ставят воздушным мешком кверху, место вскрытия смазывают спиртом, йодом, еще раз спиртом, обжигают и ножницами удаляют прилегающую к отверстию часть скорлупы. Пинцетом снимают подскорлуповую оболочку, прокалывают пастеровской пипеткой хорионаллантоисную оболочку и из полости отсасывают аллантоисную жидкость, содержащую вирус. Жидкость помещают в пробирку.

Для обнаружения вируса в исследуемом материале (в нашем опыте- аллантоисная жидкость) ставится РГА. Вирус адсорбируется на куриных эритроцитах и вызывают агглютинацию этих эритроцитов. Для постановки реакции к капле вирус-содержащего материала добавляют одну каплю 5%- ной взвеси эритроцитов. Реакция происходит в течение 5 мин.

Обнаружение типа вируса в аллантоисной жидкости проводится с помощью реакции торможения гемагглютинации (РТГА) (демонстрация).

Схема РТГА. Эта реакция может быть использована для определения типа вируса, а также для определения типа и титра антител в сыворотке. Для определения типа вируса на предметное стекло наносят по 1 капле материала, содержащего вирус. Затем в каждую каплю вносят по одной капле типовых сывороток. Контролем служит физиологический раствор и нормальная (неиммунная) сыворотка. Затем в каждую каплю вносят по 1 капле 5% взвеси эритроцитов. Результат регистрируют через 5 минут. Если вирус соответствует специфической сыворотке, то он нейтрализуется антителами этой сыворотки, и агглютинация эритроцитов не наступает, т.е. происходит торможение реакции агглютинации.