Самостоятельная работа

1. Изучить методы диагностики герпетической инфекции (табл. 37).

2. Зарисовать в тетради вирион герпесвируса.

3. Изучить под микроскопом препарат, приготовленный из материала больного с подозрением на герпетическую инфекцию методом прямой РИФ (Демонстрация).

4. Оценить результаты ИФА для диагностики герпетической инфекции по демонстрационному материалу.

5. Ознакомиться с препаратами для диагностики, лечения и профилактики герпесвирусных инфекций.

Указания к самостоятельной работе

1. Прямой метод иммунофлюоресценции обладает достаточно высокой чувствительностью и специфичностью (соответственно 80 и 90%).

Материал берут из содержимого везикул, а также из уретры, цервикального канала, шейки матки, прямой кишки и т.д.

Материал наносят на чистое обезжиренное стекло, фиксируют ацетоном (или метанолом), препарат обрабатывают флюоресцентномечеными антителами и микроскопируют под люминисцентным микроскопом.

При учете результатов обращают внимание на характер и количество антигенсодержащих клеток, локализацию специфического ярко зеленого свечения и его интенсивность. Для вируса герпеса свойственно многообразие в характере свечения: от очагов в виде «глыбок» в ядрах и свечения околоядерного участка цитоплазмы до диффузного свечения всей клетки. Возможно обнаружение многоядерных гигантских клеток.

Результат считается положительным при наличии не менее 3 морфологически неизменных клеток эпителия с интенсивным ярко-зеленым специфическим свечением типичной локализации.

Иммуноферментный метод. Для серологической диагностики герпес вирусной инфекции, обусловленной ВПГ-1 и ВПГ-2 применяются разнообразные варианты ИФМ.

Для определения антител к вирусам простого герпеса в практических лабораториях наиболее широко применяется метод твердофазного иммуноферментного анализа.

У обследуемого берут 3-5 мл крови в сухую стерильную пробирку.

Для постановки реакции испытуемые и контрольные сыворотки вносят в лунки планшета с сорбированным герпетическим антигеном и инкубируют в течение 30 минут при 37⁰С для связывания антигена и антител. Затем планшету отмывают от несвязавшихся антител ФСБ с твином пятикратно.

2. В лунки вносит антисывооротки, к иммуноглобулиам человека меченую ферментом и инкубируют в течение 30 минут при 37⁰С.

3. Затем следует пятикратное отмывание от непрореагировавших антител.

4. В лунки вносят субстрат для фермента.

При наличии антител к вирусам герпеса наступает изменение цвета. Интенсивность окраски раствора соответствует количеству фермента в смеси, следовательно, количеству образовавшихся комплексов антиген-антитело, число которых определяется содержанием противогерпетических антител в сыворотке крови больного.

Учет результатов проводят с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность на длине волны 450 нм. Результаты исследеования оценивают при соответствующих значениях ОП контролей.

Таблица №38

Препараты для диагностики, специфической терапии и диагностики герпесвирусных инфекций

Препарат	Назначение
Вакцина герпетическая культуральная живая сухая.	Препарат применяется для лечения больных герпетической инфекции. Курс лечения состоит из 1-2 циклов с интервалом 7-10 дней. Цикл состоит из 5 инъекций с интервалом 3-4 дня.
Вакцина против ветряной оспы «Варилрикс» живая аттенуированная (Бельгия).	Применяется для профилактики ветряной оспы детям от 12 мес до 13 лет однократно, старше 13 лет двукратно с интервалом 6-10 недель.
Вакцина для профилактики ветряной оспы «Окавакс» Япония.	Для создания иммунитета против ветряной оспы однократно для всех лиц.