Занятие 18

ТЕМА: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА РИККЕТСИОЗОВ И ХЛАМИДИОЗОВ.

Цель: изучить методы микробиологической диагностики риккетсиозов и хламидиозов.

Риккетсии - это грамотрицательные неподвижные бактерии, выделенные в отдельный порядок Rickettsiales, отличаются облигатным внутриклеточным паразитизмом. Риккетсии получили свое название в честь американского микробиолога Т. Риккетса, который открыл возбудителя лихорадки “скалистых гор” в 1909 году. Риккетсии полиморфны, образуют кокковидные, палочковидные, бациллярные, нитевидные формы. Размножаются поперечным делением или дроблением нитевидных форм. Спор и капсул не образуют. По типу дыхания-аэробы. Риккетсии относятся к семейству Rickettsiaceae.

_{К этому семейству относятся три рода: Rickettsia, Rochalimaea и Coxiella.}

_{Деление риккетсий на роды основано на различии в антигенном строении и локализации в пораженной клетке.}

_{Риккетсии имеют два антигена: растворимый (группоспецифический) и корпускулярный (видоспецифический). Возбудители относящиеся к роду Rickettsia, располагаются в цитоплазме, реже в ядре клетки; к роду Coxiella- в фагосомах и фаголизосомах, к роду Rochalimae- в межклеточном пространстве.}

_{Патогенные риккетсии не способны размножаться на искусственных питательных средах.}

_{Для их культивирования используют:}

_{-заражение культур тканей,}

_{-куриных эмбрионов,}

_{-экспериментальных лабораторных животных.}

_{Риккетсиозы, в основном, трансмиссивные инфекции. Природным резервуаром для большинства риккетсий являются грызуны и членистоногие. Возбудитель передается человеку при укусе кровососущих членистоногих- вшей, блох, клещей. Исключения составляет лихорадка Ку, которая передается алиментарным или воздушно-капельным путем, а естественным хозяином возбудителя является домашний скот.}

_{Риккетсии поражают клетки ретикулоэндотелиальной системы и эндотелий сосудов. В основе патогенеза риккетсиозов лежит интоксикация и развитие характерных изменений сосудов в виде эндоваскулита. Заболевания, вызываемые риккетсиями, называются риккетсиозами. Риккетсиозы человека делятся на 3 группы (табл. 26).}

_{Таблица 26}

Риккетсиозы человека

Заболевание	Возбудитель
Группа сыпного тифа эпидемический сыпной тиф эндемический сыпной тиф лихорадка Цуцугамуши	R. prowazekii R. typhi R. tsutsugamushi
Группа пятнистых лихорадок Пятнистая лихорадка Скалистых гор Марсельская лихорадка Австралийский клещевой риккетсиоз Клещевой сыпной тиф Северной Азии Везикулезный риккетсиоз	R. rickettsii R. conorii R. australis R. sibirica R. acari
Прочие риккетсиозы Ку- лихорадка Волынская лихорадка Эрлихиоз и др.	Coxiella burnetii Rochalimaea quintana Ehrlichia chafftensis, E. canis.

_{Эпидемический сыпной тиф - острое антропонозное заболевание, вызываемое Rickettsia prowazekii} и характеризующееся лихорадкой, явлениями интоксикации и поражением внутренних органов- печени, селезенки, миокарда, ЦНС и т.д.

_{Возбудителем эпидемического сыпного тифа является риккетсия Провачека (Rickettsia prowazekii), который открыт чешским ученым Провачеком в 1913 году.}

_{Источником инфекции является больной человек, кровь которого заразна в течение 20-25 дней с начала заболевания. Переносчиком является платяная вошь. Риккетсии размножаются в эпителии кишечника вши и выделяются в наружу с экскрементами. Заражение человека происходит при расчесывании места укуса и втирании экскрементов вши. Вспышки сыпного тифа сопровождают войны, голод, социальные потрясения.}

_{Инкубационный период в среднем составляет 2 недели. Заболевание начинается остро, с резкого озноба, повышения температуры до 39-40ºС, мучительной головной боли, бессонницы. На высоте лихорадки возможно нарушение сознания- бред, галлюцинации. На 4-5-е дни появляется сыпь, вследствие расширения капилляров кожи и их повреждения.}

_{Болезнь Брилля-Цинссера возникает у людей перенесших в прошлом сыпной тиф и характеризуется более легким течением.}

_{Микробиологическая диагностика.}

_{Для культивирования риккетсий Провачека применяют заражение куриного эмбриона, культур клеток. Из лабораторных животных заражают белых мышей, морских свинок.}

_{Для диагностики сыпного тифа широко применяются серологические методы: РА, РНГА, РСК, РИФ, ИФА.}

Таблица 28

Схема постановки РСК при сыпном тифе

Ингредиент	Разведение сыворотки							Контроль
	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	1:640	1		2	3
Исследуемая сыворотка Антиген Провачека Комплемент Физиологический раствор	0,25 0,25 0,25	0,25 0,25 0,25	0,25 0,25 0,25	0,25 0,25 0,25	0,25 0,25 0,25	0,25 0,25 0,25	0,25 - 0,25 0,25		- 0,25 0,25 0,25	- - - -
Термостат 1 час
Гемолитическая система: сенсибилизирование при 37^0 30 минут	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5		0,5	0,5
Термостат 30 минут
Результат	+++	+++	+++	+++	-	-	Полный гемолиз

_{Для дифференциации болезни Брилля-Цинссера от сыпного тифа применяется дифференцированное определение IgM и JgG. При сыпном тифе вначале образуются IgM, которые сменяются IgG, а при болезни Брилля-Цинссера наблюдается быстрое образование IgG. Разработана ПЦР- диагностика сыпного тифа.}

_{Специфическая профилактика основана на введении сухой живой комбинированной вакцины ЖКВСЕ.}

_{Возбудителем эндемического или крысиного сыпного тифа  является риккетсия Музера (R. typhi), которая по основным биологическим свойствам близка к риккетсии Провачека.}

_{Природным резервуаром являются крысы, полевые и домовые мыши. Переносчиком возбудителей служат блохи, гамазовые клещи.}

_{Заболевания у людей в виде единичных случаев встречаются в местностях, где наблюдаются заболевания крыс.}

_{Проявления заболевания сходны с эпидемическим сыпным тифом.}

_{Для микробиологической диагностики используют – биологическую пробу- заражение материалом от больных морских свинок- самцов. При эндемическом сыпном тифе у морских свинок развиваются признаки периорхита (скротальный феномен).}

_{-Серологическая диагностика- реакция агглютинации с диагностикумом Музера(}R. typhi_{), РСК, ИФМ.}

_{Серодиагностика- реакция агглютинации с диагностикумом Провачека и Музера, позволяет поставить диагноз крысиного сыпного тифа и дифференцировать его от эпидемического сыпного тифа.}

_{Специфическая профилактика не разработана.}

_{Ку-лихорадка (от англ. Query- неясный, неопределенный)- зоонозная инфекционная болезнь, возбудителем, которой является Coxiella burnetti.}

_{Ку-лихорадка распространена повсеместно, в том числе и в России. В эпидемическом отношении опасность представляют домашние животные, грызуны. Передача происходит трансмиссивным путем (клещи). Возможны воздушно-пылевой путь заражения при обработке шерсти, кожи животных, а также алиментарный путь при употреблении молока и молочных продуктов больных животных.}

_{Возбудитель, попадая в кровь распространяется по органам и тканям, вызывая поражение многих органов, чаще всего легких. Размножение микробов происходит в гистиоцитах и микрофагах, после разрушения которых отмечаются генерализация процесса и токсинемия. В процессе инфекции развивается гипречувствительность замедленного типа (ГЗТ). Протекает как лихорадочное заболевание. Иммунитет после перенесенного заболевания достаточно прочный.}

_{Микробиологическая диагностика основана на выделении возбудителя из крови, мокроты и мочи. Материал вводят морским свинкам, белым мышам. Из селезенки морской свинки возбудителя выделяют путем культивирования на курином эмбрионе.}

_{С целью серодиагностики применяются РА, РСК, ИФМ. С диагностической целью применяется кожно-аллергическая проба.}

_{Специфическая профилактика проводится живой ослабленной вакциной штамма М-44.}

Хламидии относятся к семейству Chlamydiaceae к роду Chlamydia. Хламидии представляют собой мелкие кокковидные бактерии (0,3-1,5 мкм.), которые являются облигатными внутриклеточными паразитами. Они неподвижны, капсул не образуют, грамотрицательны.

Для них характерен уникальный цикл развития, включающий две различные по морфологическим и биологическим свойствам формы существования:

1) элементарные тельца (ЭТ) - инфекционная форма паразита, которые имеют сферическую форму диаметром 250-ЗООнм и приспособлены для внутриклеточного существования. По Романовскому- Гимза окрашиваются в пурпурный цвет.

2) ретикулярные тельца (РТ) - вегетативная форма, имеют более крупные размеры (800 нм до 1 мкм), овальную форму. Развивается из элементарного тельца, проникшего в цитоплазму в течение 5-6 часов. В начале из ЭТ образуется инициальное тельце (вегетативное тельце), затем из вегетативного тельца образуется ретикулярное тельце (РТ).

Такой цикл продолжается 40-72 часа и завершается разрывом клетки и выходом ЭТ в межклеточное пространство.

Согласно последней классификации различают два рода хламидий : род Chlamydia, включает вид C. trachomatis и род Chlamydophila, в который включены C. psittaci, C.pneumoniae.

Рис 1. Жизненный цикл хламидий

Хламидии имеют родоспецифический, видоспецифический, вариантоспецифический- антигены:

- родоспецифический термостабильный ЛПС, находящийся в клеточной стенке;

- видоспецифический антиген белковой природы, расположенный в наружной мембране;

- вариантоспецифический антиген белковой природы.

Факторы патогенности: компоненты поверхности клетки – белки наружной мембраны обладают адгезивными и антифагоцитарными свойствами. Эндотоксин - ЛПС, аналогично как у грамнегативных бактерий. Ряд исследований предполагает наличие экзотоксина, который вызывает гибель мышей.

Патогенные хламидии вызывают такие заболевания как орнитоз, трахома, урогенитальный хламидиоз.

Орнитоз  (от греч- ornis- птица) - инфекционное заболевание, вызываемое Chlamidia psittaci и характеризующаяся интоксикацией, поражениями легких, нервной системы, гепатоспленомегалией.

Резервуаром инфекции являются различные птицы. В дикой природе- водоплавающие птицы, среди синантропных- голуби. Основной путь передачи- воздушно-капельный, воздушно- пылевой, возможны контактные и алиминтарные пути.

Инкубационный период 8-12 дней. Для клиники характерно многообразие проявлений: пневмония, бронхопневмония, миокардипатия, увеличение печени, развитие серозного менингита и др. Постинфекционный иммунитет не стойкий.

Для выделения возбудителя применяется культуральный метод- заражения культур клеток, куриного эмбриона. Ведущее значение в диагностике орнитоза имеют серологические методы - РСК, РНГА, РИФ, ИФА, и др.

Для диагностики орнитоза предложена внутрикожная аллергическая проба.

Трахома  хроническое инфекционное заболевание, вызываемое Chlamidia trachomatis и характеризующееся поражением конъюнктивы и роговицы глаз, которое может привести к слепоте.

Возбудителем трахомы является Chlamidia trachomatis, который был открыт в 1907 году Провачеком, Хальберштедтером.

Заболевание известно с древнейших времен, в настоящее время встречается в ряде развивающихся стран. В Дагестане трахома раннее была распространена и до 70-х г существовал противотрахоматозный диспансер.

C. trachomatis характеризуется всеми вышеперечисленными свойствами. Трахому вызывают серовары A, Ba, B, C, эти же серовары могут быть причиной конъюнктивитов с включениями.

Трахома распространена в Азии, Африке, Южной Америке, особенно в странах с низким уровнем санитарной культуры.

Урогенитальный хламидиоз - острое или инфекционное заболевание, вызываемое различными сероварами Chlamуdia trachomatis и характеризующееся избирательным поражением мочеполовой системы.

Возбудитель урогенитального хламидиоза- Chlamуdia trachomatis, относящийся к семейству Chlamуdiaсеа, к роду Chlamуdia. Представляет собой мелкие грамотрицательные кокковидные бактерии, не имеет спор, капсулы, неподвижна.

По антигенной структуре различают 18 сероваров Ch. trachomatis. К факторам патогенности относятся адгезины – белки наружной мембраны и эндотоксин (ЛПС), который освобождается после гибели хламидий.

Источником инфекции являются больные люди. Как источник инфекции наиболее опасны лица, у которых заболевание протекает бессимптомно. Основной механизм заражения- контактный, путь передачи- половой. Редко, но возможно инфицирование через предметы обихода- белье, мочалка и т.д. Новорожденные могут заразиться от больной матери при прохождении через родовые пути- хламидиоз глаз, дыхательных путей. Возможна также трансплацентарная передача хламидий от матери плоду (врожденный хламидиоз).

Входные ворота инфекции, как правило, слизистые половых органов. Возбудитель поражает не только эпителиальные клетки, но и обладают лимфотропностью. Хламидии венерической лимфогранулемы характеризуется высокой инвазивностью. Инкубационный период 1-2 недели, иногда до 1 месяца.

Таблица 27