- •3513 Практикум з мікробіології, вірусології та імунології
- •Частина 1 Загальна бактеріологія та імунологія
- •Передмова
- •Cписок скорочень
- •Правила роботи у бактеріологічній лабораторії. Морфологія бактерій. Світлова мікроскопія з використанням імерсійного об’єктива. Прості методи фарбування препаратів
- •Дeмонстрація
- •1. Бактеріологічний посуд: бактеріологічна петля (рис. 1д), чашка Петрі (рис. 1а), пробірки, градуйовані піпетки, колби
- •2. Предметні та покривні скельця (рис. 1б, в). Скельця з лунками. Спиртівка. Пісочний годинник, олівець “для скла”
- •3. Мікроскоп. Імерсійне масло
- •Правила роботи з імерсійною системою
- •Можливі помилки під час роботи з мікроскопом
- •Догляд за мікроскопом
- •Пояснення до самостійної роботи з теми:
- •Загальна будова навчального світлового мікроскопа
- •2. Будова бактеріальної клітини. Складні методи фарбування. Фарбування за методом Грама. Мікроскопічний метод діагностики збудників інфекційних захворювань
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «будова бактеріальної клітини. Складні методи фарбування. Фарбування за методом Грама. Мікроскопічний метод діагностики інфекційних захворювань»
- •Спори та методи їх виявлення
- •Капсула
- •Класифікація бактерій за кількістю і розташуванням джгутиків
- •Методи виявлення джгутиків у бактерій
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми
- •«Особливості ультраструктури спірохет,
- •Рикетсій, хламідій, мікоплазм.
- •Сучасні методи мікроскопічного дослідження»
- •Звивисті форми бактерій
- •Загальна схема будови Treponema pallidum
- •4. Основи асептики та антисептики. Дезінфекція. Стерилізація
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •3. Автоклав
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «основи асептики та антисептики. Дезінфекція. Стерилізація»
- •Види та завдання дезінфекції
- •Практична робота студентів
- •Пояснення до самостійної роботи з теми
- •«Фізіологія бактерій.
- •Перший етап бактеріологіного методу діагностики.
- •Біологічний метод діагностики»
- •Метаболізм
- •Конструктивний (анаболізм) Енергетичний (катаболізм)
- •6. Ріст та розмноження мікроорганізмів.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «ріст та розмноження мікроорганізмів.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «ііі – IV етап виділення чистої культури аеробних бактерій. Ферменти бактерій. Антибіотики»
- •8. Облігатні Анаероби. Виділення чистої культури
- •3. Метод Фортнера
- •4. Ріст Cl. Perfingens на середовищі Вільсон-Блера
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «облігатні Анаероби. Виділення чистої культури облігатних анаеробних бактерій»
- •V етап Врахування та аналіз результатів дослідження. Відповідь
- •9. Бактеріофаги. Генетика бактерій
- •Теоретичні питання
- •Практична робота студентів
- •Демонстрація
- •5 . Дослід із виявлення множинної стійкості мікроорганізмів до антибіотиків
- •2 Мл культури реципієнта (f-)
- •1 Мл бульйонної культури реципієнта
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «бактеріофаги та їх практичне використання. Генетика бактерій»
- •Бактеріофаги та їх практичне використання. Генетика бактерій
- •Перевага методу плр – полімеразної ланцюгової реакції для діагностики інфекційних захворювань
- •10. Нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •3.1. Замалюйте мікроскопічні препарати.
- •3.2. Бакпечатка для вивчення мікрофлори тіла людини
- •3.3. Біологічні препарати (еубіотики): колібактерин, лактобактерин, біфідумбактерин, біфікол.
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз. Вчення про інфекцію»
- •Дисбактеріоз
- •11. Вчення про інфекцію
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •1. Виявлення гемолітичної властивості бактерій
- •2. Виявлення плазмокоагулазної активності бактерій
- •4. Виявлення лецитовітелазної активності
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз. Вчення про інфекцію»
- •12. Імунітет. Фактори і механізми вродженого захисту організму
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •2. Фагоцитоз у новонародженої і дорослої людини
- •3. Визначення бактерицидної активності сироватки крові
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «імунітет. Фактори і механізми вродженого захисту організму»
- •Особливості імунної системи
- •13. Антигени
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація Діагностичні препарати: Діагностикуми і антигени
- •Алергени для шкірноалергічних проб
- •Лікувально-профілактичні препарати
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «антигени»
- •Класифікація антигенів
- •Антигени – сторонні макромолекули
- •Інфекційні
- •14. Адаптивна гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •1. Імунні сироватки (антитоксичні) та імуноглобуліни
- •2. Титрування антитоксичної сироватки методом флокуляції
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації»
- •Набутий (адаптивний) імунітет
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •1. Реакція непрямої гемаглютинації (рнга)
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «серологічні реакції: реакція зв’язування комплементу (рзк), реакції з використанням мічених антитіл та антигенів – іфа, ріф, ріа»
- •16. Адаптивна клітинна імунна відповідь. Імунологічна толерантність. Регуляція імунної відповіді
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «адаптивна клітинна імунна відповідь. Імунологічна толерантність. Регуляція імунної відповіді»
- •Механізм цитотоксичної дії т-кілера на клітину-мішень
- •17. Оцінка імунного статусу людини. Принципи функціонування імунної системи
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «оцінка імунного статусу людини. Принципи функціонування імунної системи»
- •18. Протиінфекційний імунітет
- •Теоретичне питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «протиінфекційний імунітет»
- •Антигенспецифічна імунна відповідь
- •Зв’зок типу імунної відповіді з локалізацією інфекційних агентів
- •19. Патологія імунної системи
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «патологія імунної системи»
- •Типи алергічних реакцій
- •20. Специфічна профілактика та терапія інфекційних захворювань. Лікувальні, профілактичні та діагностичні імунологічні препарати
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Діагностичні препарати
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «специфічна профілактика і терапія інфекційних захворювань. Лікувальні, профілактичні та діагностичні імунологічні препарати»
- •Список рекомендованої літератури
- •Практикум з мікробіології, вірусології та імунології
- •Частина 1 Загальна бактеріологія та імунологія
Пояснення до самостійної роботи з теми
«Особливості ультраструктури спірохет,
Рикетсій, хламідій, мікоплазм.
Сучасні методи мікроскопічного дослідження»
Групи звивистих (спіралеподібних) бактерій |
|
Характеристика рикетсій |
Дрібні поліморфні (кокоподібна форма, паличкоподібна, іноді ниткоподібна) грамнегативні бактерії, внутрішньоклітинні паразити |
Життєвий цикл рикетсій |
1-шастадія – вегетативна. 2-гастадія – спокою. Рикетсії, що знаходяться в першій стадії, мають паличкоподібну форму, активно розмножуються шляхом бінарного поділу й активно рухаються. Хоча рикетсії мають власну систему синтезу білка та мобілізації енергії, але їх життєдіяльність тісно пов’язана з метаболізмом клітини-хазяїна, тому вони не можуть розмножуватися поза нею.Устадії спокою – мають сферичну форму і не розмножуються |
Будова рикетсій |
Як усі типові прокаріоти, рикетсії мають клітинну стінку, як у всіх грамнегативних бактерій, цитоплазматичну мембрану, нуклеоїд |
Приклади бактерій, які належатьдо родуRickettsia |
Rickettsia prowazekii, R.typhi, R.canada, R.sibirica |
Характеристика хламідій |
Дрібні грамнегативні нерухливі бактерії, які розмножуються тільки в цитоплазмі еукаротичних клітин. Метаболізм таких бактерій залежить від метаболізму клітини-хазяїна, тому що у них відсутня здатність синтезувати свої власні високоенергетичні сполуки (АТФ) („енергетичні паразити”) |
Будова хламідій |
Хламідії мають клітинну стінку, хімічний склад якої подібнийдотакого,яку грамнегативних бактерій, нуклеоїд, рибосоми, цитоплазму, цитоплазматичну мембрану |
Основні стадії життєвого циклу хламідій |
1. Елементарні тільця. 2. Ініціальні, або ретикулярні тільця. 3. Проміжні тільця. Життєвий цикл закінчується ущільненням проміжних форм і утворенням елементарних тілець |
Методи фарбування, які використовуються для виявлення хламідій в інфікованих клітинах |
Романовського-Гімзе, Кастенади, Маккіавелло та ін. |
Приклади патогенних для людини хламідій |
Chlamуdia trachomatis, Chlamydia psittaci, Chlamydia pneumonia |
Характеристика мікоплазм |
Плеоморфні (кокоподібні, ниткоподібні) мікроорганізми, які не мають клітинної стінки. Мікоплазми оточені тонкою тришаровою мембраною. Розмір геному у мікоплазм –найменшийсеред прокаріот. Для мікоплазм притаманна мінімальна кількість органел: цитоплазматична мембрана, нуклеоїд, рибосоми. Розмножуються шляхом бінарного поділу, брунькування. Через відсутність клітинної стінки мікоплазми чутливі до дії механічних, фізичних та хімічних факторів |
Приклади патогенних для людини мікоплазм |
Mycoplasma pneumoniae, M.hominis, M. arthritidis, Ureaplasma urealyticum |
Характеристика спірохет |
Спіралеподібноїформи рухливі грамнегативні бактерії. За морфологічними, тинкторіальнимита біологічними властивостями спірохети: грамнегативні, хемоорганотрофи, рухливі, розмножуються поперечним діленням; ендоспор не утворюють. Серед спірохет є як аеробні, так і факультативно-анаеробні види |
Будова спірохет |
Центральна структура клітини є протоплазматичнимциліндром, в якому містяться цитоплазма, нуклеоїд, рибосоми і різні комплекси ферментів. Протоплазматичний циліндр оточений цитоплазматичною мембраною та клітинною стінкою, що містить пептидоглікан. Протоплазматичний циліндр має постійну спіральну форму, завдяки пептидоглікану, утворюючи первинні завитки. Їх кількість, тип, шаг, висота, кут нахилу різні у кожного виду та відіграють важливе систематичне значення. Навколо спіралеподібногоцитоплазматичного циліндрарозташовується периплазматичний простір,уякому знаходяться джгутики. Один кінець кожного джгутикаприкріплений до одного з полюсів протоплазматичного циліндра, а інший – приблизно посередині. Периплазматичні джгутики спіралеподібнообвивають протиплазматичний циліндр, утворюючи вісьову нитку. Поверх джгутиків розміщується багатошарова зовнішня мембрана – зовнішня оболонка. Внаслідок такої будови рухливість спірохет відрізняється від рухливості інших бактерій |
Приклади спірохет патогенних для людини |
Представники роду Treponema, Borrelia, Leptospira |
Особливості морфології лептоспір |
Кінці цих спірохет загнуті у вигляді крючків з ущільненнями на кінцях. Утворюючи вторинні завитки, вони мають вигляд літер SабоC; мають 2осьові нитки |
Особливості генетичного апаратаборелій |
Генетичний апарат складається з невеликих за розміром лінійниххромосом та набору циркулярних та лінійних плазмід |
Особливості темнопольної мікроскопії |
Вивчення нефарбованих мікроорганізмів (наприклад спірохет), яківидноу відбитку світлі на темному полі |
Мета використання темнопольної мікроскопії |
Для виявлення в непофарбованих (нативних) препаратах збудників інфекційних захворювань, а також для вивчення рухливості мікроорганізмів |
Особливості фазово-контрастної мікроскопії |
Ця мікроскопія не збільшує роздільної здатності оптичної системи, але допомагає виявити нові деталі будови живих мікроорганізмів, вивчити різні стадії їх розвитку, вплив на них фізичних та хімічних факторів |
Особливості люмінесцентної мікроскопії |
|
Переваги люмінесцентної мікроскопії |
-можливість досліджувати як живі, так і загиблі мікроорганізми, прозорих та непрозорих об׳єктів, виявлення окремих бактерій, вірусів грибів та їх антигенів; -кольорове зображення; -високий рівень контрастності |
Основні характеристики електронного мікроскопа |
У електронному мікроскопі замість світла використовується потік електронів у безповітряному середовищі, на шляху яких знаходиться анод |
Мета використання електронної мікроскопії |
Для детального вивчення будови мікроорганізмів, а у вірусології з діагностичною метою |
Мікроскопія з використанням фазово-контрастного пристрою |
Цей вид мікроскопії розроблений для спостереження за прозорими об’єктами. Вінгрунтуєтьсяна перетворенняхфазових змін,якихзазнаєсвітловахвиляпід часпроходженнячерез об’єкт, у видимі амплітудні за допомогою певного оптичного пристрою. Метод використовують для дослідження живих клітин мікроорганізмів, контрастність яких досягається оптичним шляхом без втручання в їх фізіологічні процеси |
Таблиця 1 – Характеристика спірохет
Ознака |
Рід Borrelia |
Рід Treponema |
Рід Leptospira |
Морфологія |
Великі спіралеподібні бактерії |
Дрібні штопороподібно закручені нитки |
S або С-подібна |
Завитки |
3 – 5 |
8 – 12 |
Первинні (дрібні) та вторинні |
Кінці |
Ниткоподібні |
Джгутикоподібні |
Точкові або гудзикоподібні |
Фарбування за Романовським-Гімзе |
Фіолетово-сині |
Ніжно-рожеві |
Яскраво-рожеві |
Приклади патогенних представників роду |
B.reccurentis, B.persica, B.caucasіca, B.burgdorferi |
T.pallidum |
L.interrogans, L.grippotyphosa, L.icterohaemorrhagicae |