- •3513 Практикум з мікробіології, вірусології та імунології
- •Частина 1 Загальна бактеріологія та імунологія
- •Передмова
- •Cписок скорочень
- •Правила роботи у бактеріологічній лабораторії. Морфологія бактерій. Світлова мікроскопія з використанням імерсійного об’єктива. Прості методи фарбування препаратів
- •Дeмонстрація
- •1. Бактеріологічний посуд: бактеріологічна петля (рис. 1д), чашка Петрі (рис. 1а), пробірки, градуйовані піпетки, колби
- •2. Предметні та покривні скельця (рис. 1б, в). Скельця з лунками. Спиртівка. Пісочний годинник, олівець “для скла”
- •3. Мікроскоп. Імерсійне масло
- •Правила роботи з імерсійною системою
- •Можливі помилки під час роботи з мікроскопом
- •Догляд за мікроскопом
- •Пояснення до самостійної роботи з теми:
- •Загальна будова навчального світлового мікроскопа
- •2. Будова бактеріальної клітини. Складні методи фарбування. Фарбування за методом Грама. Мікроскопічний метод діагностики збудників інфекційних захворювань
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «будова бактеріальної клітини. Складні методи фарбування. Фарбування за методом Грама. Мікроскопічний метод діагностики інфекційних захворювань»
- •Спори та методи їх виявлення
- •Капсула
- •Класифікація бактерій за кількістю і розташуванням джгутиків
- •Методи виявлення джгутиків у бактерій
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми
- •«Особливості ультраструктури спірохет,
- •Рикетсій, хламідій, мікоплазм.
- •Сучасні методи мікроскопічного дослідження»
- •Звивисті форми бактерій
- •Загальна схема будови Treponema pallidum
- •4. Основи асептики та антисептики. Дезінфекція. Стерилізація
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •3. Автоклав
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «основи асептики та антисептики. Дезінфекція. Стерилізація»
- •Види та завдання дезінфекції
- •Практична робота студентів
- •Пояснення до самостійної роботи з теми
- •«Фізіологія бактерій.
- •Перший етап бактеріологіного методу діагностики.
- •Біологічний метод діагностики»
- •Метаболізм
- •Конструктивний (анаболізм) Енергетичний (катаболізм)
- •6. Ріст та розмноження мікроорганізмів.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «ріст та розмноження мікроорганізмів.
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «ііі – IV етап виділення чистої культури аеробних бактерій. Ферменти бактерій. Антибіотики»
- •8. Облігатні Анаероби. Виділення чистої культури
- •3. Метод Фортнера
- •4. Ріст Cl. Perfingens на середовищі Вільсон-Блера
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «облігатні Анаероби. Виділення чистої культури облігатних анаеробних бактерій»
- •V етап Врахування та аналіз результатів дослідження. Відповідь
- •9. Бактеріофаги. Генетика бактерій
- •Теоретичні питання
- •Практична робота студентів
- •Демонстрація
- •5 . Дослід із виявлення множинної стійкості мікроорганізмів до антибіотиків
- •2 Мл культури реципієнта (f-)
- •1 Мл бульйонної культури реципієнта
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «бактеріофаги та їх практичне використання. Генетика бактерій»
- •Бактеріофаги та їх практичне використання. Генетика бактерій
- •Перевага методу плр – полімеразної ланцюгової реакції для діагностики інфекційних захворювань
- •10. Нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •3.1. Замалюйте мікроскопічні препарати.
- •3.2. Бакпечатка для вивчення мікрофлори тіла людини
- •3.3. Біологічні препарати (еубіотики): колібактерин, лактобактерин, біфідумбактерин, біфікол.
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз. Вчення про інфекцію»
- •Дисбактеріоз
- •11. Вчення про інфекцію
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •1. Виявлення гемолітичної властивості бактерій
- •2. Виявлення плазмокоагулазної активності бактерій
- •4. Виявлення лецитовітелазної активності
- •Демонстрація
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «нормальна мікрофлора тіла людини. Дисбактеріоз. Вчення про інфекцію»
- •12. Імунітет. Фактори і механізми вродженого захисту організму
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •2. Фагоцитоз у новонародженої і дорослої людини
- •3. Визначення бактерицидної активності сироватки крові
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «імунітет. Фактори і механізми вродженого захисту організму»
- •Особливості імунної системи
- •13. Антигени
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація Діагностичні препарати: Діагностикуми і антигени
- •Алергени для шкірноалергічних проб
- •Лікувально-профілактичні препарати
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «антигени»
- •Класифікація антигенів
- •Антигени – сторонні макромолекули
- •Інфекційні
- •14. Адаптивна гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •1. Імунні сироватки (антитоксичні) та імуноглобуліни
- •2. Титрування антитоксичної сироватки методом флокуляції
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «гуморальна імунна відповідь. Імуноглобуліни (антитіла). Серологічні реакції флокуляції, нейтралізації»
- •Набутий (адаптивний) імунітет
- •Практична робота
- •Демонстрація
- •1. Реакція непрямої гемаглютинації (рнга)
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «серологічні реакції: реакція зв’язування комплементу (рзк), реакції з використанням мічених антитіл та антигенів – іфа, ріф, ріа»
- •16. Адаптивна клітинна імунна відповідь. Імунологічна толерантність. Регуляція імунної відповіді
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «адаптивна клітинна імунна відповідь. Імунологічна толерантність. Регуляція імунної відповіді»
- •Механізм цитотоксичної дії т-кілера на клітину-мішень
- •17. Оцінка імунного статусу людини. Принципи функціонування імунної системи
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «оцінка імунного статусу людини. Принципи функціонування імунної системи»
- •18. Протиінфекційний імунітет
- •Теоретичне питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «протиінфекційний імунітет»
- •Антигенспецифічна імунна відповідь
- •Зв’зок типу імунної відповіді з локалізацією інфекційних агентів
- •19. Патологія імунної системи
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «патологія імунної системи»
- •Типи алергічних реакцій
- •20. Специфічна профілактика та терапія інфекційних захворювань. Лікувальні, профілактичні та діагностичні імунологічні препарати
- •Теоретичні питання
- •Практична робота
- •Діагностичні препарати
- •Пояснення до самостійної роботи з теми «специфічна профілактика і терапія інфекційних захворювань. Лікувальні, профілактичні та діагностичні імунологічні препарати»
- •Список рекомендованої літератури
- •Практикум з мікробіології, вірусології та імунології
- •Частина 1 Загальна бактеріологія та імунологія
Передмова
Інфектологія та імунологія є фундаментальними дисциплінами, які обумовлюють розвиток медичної науки. Досягнення сучасної медичної мікробіології лежать в основі боротьби з інфекційними захворюваннями. Понад 70% усіх захворювань людини мають інфекційну природу і викликаються різноманітними патогенними мікроорганізмами. Мікробний фактор відіграє важливу роль у патогенезі багатьох соматичних та онкологічних захворювань.
У першій частині посібника, підготовленій співробітниками медичного інституту Сумського державного університету, на основі молекулярно-генетичних та молекулярно-біологічних даних викладені та узагальнені сучасні уявлення стосовно природи та властивостей патогенних мікроорганізмів.
У патогенезі майже всіх інфекційних та неінфекційних захворювань суттєву роль відіграють імунні механізми, а тому базисні знання з імунології необхідні всім майбутнім лікарям. Імунологія є порівняно молодою та динамічною наукою, яка розвивається стрімкими темпами. Особливістю цієї науки є те, що її «серцевина» не зовсім стабілізована, і змінюється в часі значно більше, ніж інші науки. Автори мали на меті системно висвітлити основні положення імунології, необхідні для розуміння патогенетичних засад захворювань інфекційної та неінфекційної етіології.
Сучасна діагностика стану імунітету базується, головним чином, на оцінці показників гуморального і клітинного стану імунної системи. В її основі лежать сучасні серологічні та генно-молекулярні методи.
Імунодіагностика адаптивного імунітету різноманітна і залежить від мети, яку ставить лікар. Це може бути серологічна специфічна діагностика, яка віддзеркалює характер відновлення імунної системи.
Усе це обумовлює важливість мікробіології, вірусології та імунології як базисної дисципліни, у підготовці сучасних лікарів.
Підручник призначений для студентів вищих медичних закладів та відповідає вимогам офіційно затверджених програм викладання мікробіології, вірусології та імунології в Україні.
Cписок скорочень
БГКП –бактерії групи кишкових паличок
БГФ – базофільні гранулярні фагоцити
ВСА – вісмут сульфіт агар
ЖСА – жовтково сольовий агар
ІФА – імуноферментний аналіз
МПА – м'ясопептонний агар
МПБ – м'ясопептонний бульон
НАБ – неаглютинуючі бактерії
ОД – одиниці дії
ПАР – поверхнево активні речовини
ПМЯЛ – поліморфноядерні лейкоцити
РБТЛ – реакція бласттрансформації лейкоцитів
РГМЛ – реакція гальмування міграції лейкоцитів
РЗК – реакція зв’язування комплементу
РІА – радіоімунологічний аналіз
РІФ – реакція імунофлюоресценції
РН – реакція нейтралізації
РНГА – реакція непрямої гемаглютинації
РП – реакція преципітації
ФГА – фітогемаглютинін
ФІ – фагоцитарний індекс
ФІТЦ – фітоізотіоцинат
ФНП – фактор некрозу пухлин
ФЧ – фагоцитарне число
ШКТ – шлунково-кишковий тракт
Правила роботи у бактеріологічній лабораторії. Морфологія бактерій. Світлова мікроскопія з використанням імерсійного об’єктива. Прості методи фарбування препаратів
Актуальність теми: готувати препарати з будь-якого патологічного матеріалу хворого або культури бактерій на предметному склі, фарбувати та мікроскопувати їх для визначення морфології збудника з метою орієнтовної діагностики інфекційного захворювання чи ускладнення повинен уміти кожний лікар.
Мета – Засвоїти правила роботи у бактеріологічній лабораторії; уміти готувати і мікроскопувати пофарбовані препарати бактерій на предметному склі та розрізняти їх за морфологією.
ТЕОРЕТИЧНІ ПИТАННЯ
Правила роботи в мікробіологічній лабораторії.
Морфологія та класифікація мікроорганізмів.
Світлова мікроскопія: мета використання, принципи імерсійної мікроскопії.
Розміри бактеріальної клітини та способи їх визначення.
Правила приготування препаратів із культур мікроорганізмів із рідкого та щільного живильних середовищ.
Прості методи фарбування мікроорганізмів.
ПРАКТИЧНА РОБОТА
Робота 1. Ознайомитися з правилами роботи в навчальній бактеріологічній лабораторії
Правила роботи в навчальній бактеріологічній
лабораторії на кафедрі мікробіології
Робота на кафедрі мікробіології та в бактеріологічній лабораторії потребує суворого дотримання спеціальних правил, оскільки дослідження проводяться з використанням культур живих мікроорганізмів і заразного матеріалу від хворих та експериментальних тварин.
Дотримання цих правил необхідно не тільки для особистої безпеки, але йдля безпеки оточуючих нас людей.
Усі студенти повинні працювати в медичних халатах, шапочках, гумових рукавичках та змінному взутті.
Кожен студент повинен працювати лише на закріпленому за ним робочому місці.
Забороняється заходити у навчальні лабораторії в головних уборах та верхньому одязі, класти на столи портфелі та сумки.
У приміщенні бактеріологічної лабораторії категорично забороняється курити, вживати їжу, зберігати продукти харчування.
На робочому столі повинні знаходитися тільки предмети, необхідні для проведення бактеріологічних досліджень: спиртівка, пастерівські та градуйовані піпетки, пінцети, бактеріологічні петлі, шпателі, предметні та накривні скельця, пробірки, штативи, чашки Петрі, мікроскоп.
Переливати рідини, які містять патогенні мікроорганізми,категорично заборонено. При набиранні таких рідин у піпетки потрібно користуватися гумовими балонами або грушами.
При потраплянні інфекційного матеріалу на руки, стіл, підлогу та інші поверхні сліднегайно повідомити про це викладача і в його присутності провести дезінфекцію заражених ділянок, потім обробити руки дезрозчином і ретельно їх вимити з милом.
Оскільки деякі мікроорганізми, особливо спори грибів, є алергенами, не допускається їх розпилення, тому не можна залишати відкритими чашки Петрі, пробірки, колби з культурами мікроорганізмів.
У навчальній лабораторії не дозволяються зайві ходіння, різкі рухи, непотрібні розмови. Виконання цих вимог запобігає прониканню сторонніх мікроорганізмів із повітря і ротової порожнини в досліджуваний матеріал.
Після закінчення роботи протирають імерсійний об’єктив мікроскопа, столи дезінфікують, предмети, матеріали, інструменти, інфіковані під час виконання практичної роботи, збирають у бікси для знезараження та дезінфікують руки.
Рисунок 1 – Бактеріологічний посуд та інструменти
Правила дезінфекції робочого місця:
зробіть з вати кульку діаметром близько 2 см;
візьміть кульку пінцетом, змочіть її в
дезінфекційному розчині;
протріть цією кулькою поверхню столу;
опустіть кульку в посуд з дезінфекційним розчином;
витріть стіл вологою серветкою.
Правила дезінфекції рук:
зробіть з вати 2 кульки діаметром близько 2 см;
візьміть кульку пінцетом, змочіть її в дезінфекційному розчині;
протріть нею руки в такій послідовності: ліва рука – тильний бік, долонний бік, між пальцями, нігтьова пластинка, під нігтями; права рука – у такійсамійпослідовності;
опустіть кульку в посуд із дезінфекційним розчином;
візьміть пінцетом другу кульку і все повторіть;
вимийте руки водою з милом.
Увага! Пам’ятайте про те, що студенти несуть відповідальність за мікроскопи, якими користуються, інше лабораторне обладнання, чистоту робочого місця, дотримання правил техніки безпеки.
Робота 2. Вивчити демонстрацію. Зарисувати мікропрепарати в протокол