Задания для подготовки

1. Зарисовать из атласа микропрепараты чистых культур Bacillus anthracis,Brucella melitensis, Francisella tularensis (окраска по Граму)Yersinia pestis (окраска метиленовым синим). Указать морфологию и тинкториальные свойства.

2. Решить задачу.

В населенном пункте, неблагополучном по бруцеллезу у овец, в семье, состоящей из 4 человек, заболела дочь, студентка, приехавшая на зимние каникулы, острым заболеванием с высокой температурой; предполагаемый диагноз – «Бруцеллез?». Проведено лабораторное обследование на бруцеллез всех членов семьи, результаты представлены в таблице.

Обследуемые		Отец	Мать	Дочь	Сын	Какие методы диагностики использованы?
Вид исследований	Выделение гемокльтуры	–	–	+	+
	Реакция Райта	–	1:100	–	1:400
	Реакция Бюрне	+	+	–	+
Вопросы	Кто болен острой формой бруцеллеза?
	У кого скрытая форма инфекции или бруцеллез в прошлом?
	У кого бессимптомная форма болезни?

Практическая работа

Р а б о т а №1

Цель: Освоить методы микробиологической диагностики бруцеллеза (реакции Хадделсона, Райта, Бюрне и бактериологический метод).

Задача. Ветфельдшер обратился к врачу с жалобами на потливость, волнообразную лихорадку, головную боль, боли в мышцах и суставах. Врач предположил, что у больного бруцеллез. Было проведено комплексное бактериологическое, серологическое и аллергологическое исследование. Реакция Бюрне на 2-ой неделе заболевания оказалась сомнительной. На исследование взята сыворотка крови для постановки реакции Хеддлсона с бруцеллезным диагностикумом на стекле. Дать диагностическую оценку полученных результатов. Оформить протокол исследования.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Берут обезжиренное предметное стекло размером 912 см, расчерчивают на 5 квадратов. В первом квадрате записывают номер сыворотки; в последующие квадраты с помощью пипетки вносят ингредиенты как указано в таблице.

Содержимое квадратов перемешивают, аккуратно покачивая стекло. Затем стекло равномерно подогревают над пламенем спиртовки до 37С около 2 мин. Стекло необходимо держать высоко над пламенем, чтобы капли не высыхали. В случае положительной реакции в первые же минуты появляются хлопья голубого или фиолетового цвета, т.к. бруцеллезный диагностикум окрашен метиленовой синькой или генцианвиолетом. Степень выраженности реакции должна быть не менее ++. Максимальный срок наблюдения 8 мин. В К_сыв.и К_Ag. должна отсутствовать спонтанная агглютинация.

Если агглютинация отсутствует со всеми дозами сыворотки – результат отрицательный;

Если агглютинация положительна с дозой сыворотки 0,04 мл – результат сомнительный;

Если агглютинация положительна с дозами сыворотки 0,02-0,01 мл – результат положительный;

Если агглютинация положительна со всеми дозами сыворотки – результат резко положительный.

Для диагностики бруцеллеза имеет значение только положительный и резко положительный результаты. В этом случае реакция агглютинации ставится в развернутом ряду – реакция Райта.

Реакция Райта ставится с разведениями сыворотки обследуемого и бруцеллезным диагностикумом, разведенным 1:10. Пробирки термостатируют при 37С в течение 24 ч. Диагностический титр реакции равен 1:200. При отрицательном или сомнительном результатах рекомендуется через 7-10 дней повторить реакцию. Реакция Райта может быть положительной не только у больных, но у вакцинированных и переболевших, поэтому для определения инфекционной природы антител проводится исследование парных сывороток. Нарастание титра антител в 2 и более раз является достоверным серологическим подтверждением заболевания бруцеллезом.

ПРОТОКОЛ

Цель: