4. Бактериологическое исследование спинномозговой жидкости (смж)

Для бактериологического анализа обычно используют СМЖ, взятую при люмбальной пункции или при пункции боковых желудочков мозга. СМЖ берут как можно раньше, желательно до начала антибактериального лечения. Ликвор из шприца без иглы над спиртовкой вносят в стерильную центрифужную пробирку в количестве 1-2 мл. Ликвор для исследования немедленно доставляют в лабораторию, при отсутствии такой возможности материал сохраняют при 37°С в течение нескольких часов. Для пересылки материала используют изотермальные ящики, где поддерживается температура 37°С.

С целью выделения более широкого спектра возбудителей, производят посев ликвора на питательные среды в соответствии с приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85 г на сывороточный агар, 5%-ный КА, «шоколадный» агар и МПА.

Проводят посев 0,1 мл гнойного ликвора или 0,1 мл суспендированного в стерильной воде осадка из СМЖ на чашки Петри. Капли материала слегка растирают стерильным шпателем Дригальского по поверхности агара. После этого чашку с МПА помещают в термостат в обычной атмосфере при 37°С, а чашки с сывороточным и «шоколадным» агаром инкубируют при повышенной концентрации СО₂. Для этого чашки помещают в эксикатор, в котором создается повышенное содержание СО₂ за счет горящей свечи или СО₂-инкубатор. Инкубация при повышенных концентрациях СО₂ способствует выявлению патогенных нейссерий, пневмококков, листерий и др.

В пробирку, к оставшемуся от посева осадку, добавляют 5 мл стерильного 0,1%-ного полужидкого агара и помещают в термостат для накопления. На второй день просматривают сделанные накануне посевы СМЖ. При появлении роста на плотных питательных средах изучают характер роста и мазки из выросших колоний, окрашенные по Граму. Проводят отсевы на элективные среды для получения чистой культуры с последующей их идентификацией.

СМЖ является стерильной средой, поэтому выделение любого микроорганизма должно расцениваться как положительный результат. Редко нахождение условно-патогенных микроорганизмов и сапрофитов, которые ранее никогда не выявлялись, может вызвать сомнение и расцениваться как загрязнение или в момент взятия пробы, или при повторных высевах со среды обогащения. В таких случаях большое значение имеют клинические данные.

При отсутствии роста колоний на твердых средах, делают высев из среды накопления на чашки с сывороточным и кровяным агаром. Твердые среды с посевами ликвора при отсутствии роста на протяжении 24 ч инкубируют в течение 3-5 дней. При отрицательных результатах высевы повторяют через 5 дней.

5. Бактериологическое исследование желчи

Желчь собирают при помощи дуоденального зонда в процедурном кабинете отдельно по порциям А, В и С в три стерильные пробирки, либо во время операции с помощью шприца в одну пробирку, соблюдая правила асептики. Полученные порции желчи доставляют в лабораторию не позднее 1-2 ч от момента взятия, следя за тем, чтобы пробирки находились в строго вертикальном положении. При поступлении желчи в бактериологическую лабораторию проверяют ее кислотность по индикаторной бумажке, рН < 7 свидетельствует о присутствии желудочного сока, и желчь не исследуют.

Посев исследуемого материала, производят в соответствии с приказом МЗ СССР № 535 от 22.04.85 г на следующие питательные среды: 5%-ный кровяной агар, среду Эндо, МПА, среду Китта-Тароцци (для выявления анаэробов) и другие необходимые питательные среды.

По 0,1 мл каждой порции желчи, берут пипеткой и высевают на чашки Петри стерильным шпателем Дригальского, равномерно распределяя по всей поверхности агаризованной питательной среды; по 0,5 мл желчи засевают на чашку со средой Эндо. Для обеспечения роста анаэробов производят посев в две пробирки со средой Китта-Тароцци, одну из которых прогревают на водяной бане 20 мин при 80°С для уничтожения аэробной флоры. Оставшуюся желчь (сливают все порции в одну пробирку) заливают средой обогащения (1 : 10) и вместе со сделанными посевами помещают в термостат при 37°С на 24 ч. В случае бактериального роста на кровяном агаре подсчитывают количество колоний каждого вида, пересчитывают на 1 мл исследуемого материала и после бактериоскопии окрашенных по Граму мазков проводят дальнейшую идентификацию культур и определяют чувствительность к антибиотикам. С целью выделения сальмонелл в последующие 3 дня делают высевы на висмут-сульфитный агар из среды обогащения.

Наиболее достоверным является исследование желчи, полученной во время операции. При дуоденальном зондировании возможна контаминация желчи микрофлорой ротовой полости и верхних отделов пищеварительного тракта. Так, стафилококки и стрептококки находят в дуоденальном содержимом значительно чаще, чем в желчном пузыре при оперативном вмешательстве. Поэтому следует с особой осторожностью подходить к определению этиологической роли указанных микроорганизмов при холециститах и холангитах. Выделение золотистого стафилококка в значительном количестве может свидетельствовать о наличии печеночного или диафрагмального абсцесса. Обнаружение в дуоденальном содержимом сапрофитных нейссерий и дрожжеподобных грибов свидетельствует о контаминации желчи микрофлорой ротовой полости.