V Международный молодежный медицинский конгресс

Клиническая биохимия

117

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

Е.С. Алексеевская

PGC-1A В КАЧЕСТВЕ СИСТЕМНОГО МАРКЕРА МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ

(научный руководитель - д.м.н., проф. А.А. Жлоба, д.м.н. О.М. Моисеева)

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова, Федеральный Центр сердца, крови и эндокринологии имени В.А. Алмазова Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. Поиск специфичных системных маркеров митохондриальной дисфункции (МД) является актуально задачей клинической биохимии.

Цель. Оценка 1-альфа коактиватора гамма-рецептора, активирующего пролиферацию пероксисом (PGC 1a), в качестве показателя МД.

Материалы и методы. Проанализированы образцы плазмы крови 59 пациентов с аневризмой восходящего отдела аорты в возрасте от 30 до 77 лет (средний возраст в группе 58±9 лет, 44 мужчины и 15 женщин), а также 6 здоровых лиц в возрасте от 21 до 23 лет. Верификация МД проводилась по концентрации молочной кислоты (МК) в плазме крови. Уровень PGC 1a определяли иммуноферментным методом, концентрацию МК – колориметрически с использованием энзиматической тест-системы.

Результаты. Концентрация МК в группе пациентов 1,08(0,91-1,53) была достоверно выше, чем в контрольной группе – 0,49 (0,45-0,53) ммоль/л.

В группе здоровых лиц уровень PGC 1a варьировал незначительно 76,8(74,8-76,8) нг/л и был достоверно ниже, чем у пациентов – 137,2(105,6-168,8) нг/л. При разделении на подгруппы концентрация PGC 1a была достоверно выше у пациентов средней возрастной группы (46-60 лет, n=25) по сравнению с уровнем в группе пожилого возраста (61-75 лет, n=25) – 156,4(126,2-178,4) и 112,5(91,9-150,2) нг/л соответственно.

PGC-1α – цитоплазматический белок, регулирующий функции и биогенез митохондрий. Возможно, что увеличение у пациентов концентрации PGC-1α в крови связано с повышением потери данного белка клетками. Меньшее возрастание концентрации PGC-1α у пожилых, вероятно, связано с общим торможением белоксинтезирующей функции с возрастом.

Выводы. Нарастание в плазме крови белка PGC-1α является ранним признаком развития дисфункции митохондрий.

М.О. Новак

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ S-НИТРОЗОТИОЛОВ СЛЮНЫ В КАЧЕСТВЕ МАРКЕРА ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ

(научный руководитель - д.м.н., проф. Т.Ф. Субботина)

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. Оксид азота (NO) является признанным маркером функции эндотелия, однако он отличается крайней нестабильностью. Поэтому актуально выяснение диагностического значения относительно стабильной формы NO - S-нитрозотиолов (RSNO). Оптимальным субстратом для неинвазиавной лабораторной диагностики является слюна.

Цель. Исследовать взаимосвязь между уровнем RSNO слюны, показателями системной гемодинамики и маркерами предрасположенности к артериальной гипертензии.

Материалы и методы. Обследовано 54 соматически здоровых лица обоего пола в возрасте 18-35 лет. Сбор слюны проводили в дневное время после 2-3-часового голодания без стимуляции. RSNO слюны и плазмы крови определяли после УФ-декомпозиции флуориметрически в проточно-инжекционной системе с использованием флуоресцентного зонда DAF-2 и S-нитрозоглутатиона в качестве калибратора. Измерение артериального давления и пульса проводили утром после сна, в положении лежа. Проводился осмотр полости рта с определением суммы кариозных, пломбированных и удаленных зубов (индекса КПУ).

Результаты. Методика определения RSNO адаптирована для исследования слюны. [Уровни RSNO составили в 1301,92±1185,81 нМ в плазме и 132,64±84,78 нМ в слюне]. В исследуемой группе лиц была выявлена достоверная положительная корреляционная связь между систолическим артериальным давлением и уровнем RSNO в плазме крови (Rs= 0,504; p<0,05), что подтверждает зависимость функционального состояния сосудов от уровня S-нитрозотиолов. Также выявлена достоверная отрицательная корреляция между уровнем S- нитрозотиолов в слюне и средним значением пульса (Rs= -0,650; p<0,05).

118

V Международный молодежный медицинский конгресс

Выводы. Уровень S-нитрозотиолов как плазмы, так и слюны может рассматриваться в качестве маркера эндотелиальной дисфункции, однако последний имеет преимущество, поскольку биологический материал получают неинвазивно.

Н.А. Правосудова РОЛЬ КАРБОКСИПЕПТИДАЗЫ Н В РЕАЛИЗАЦИИ МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ ДИАЗЕПАМА

(научный руководитель - д.м.н., проф. М.Т. Генгин)

Пензенский государственный университет Пенза, Российская Федерация

Введение. Диазепам изменяет уровень многих нейропептидов и является экзогенным лигандом бензодиазепиновых рецепторов. В конечной стадии процессинга регуляторных пептидов участвует карбоксипептидаза Н (КПН) – фермент, катализирующий отщепление остатков аргинина и лизина с С-конца предшественников.

Цель. Цель нашей работы – исследование влияния однократного введения диазепама на активность КПН в тканях самцов крыс.

Материалы и методы. Объектом исследования служили гипоталамус, четверохолмие, мозжечок, стриатум, гиппокамп, большие полушария, гипофиз, надпочечники и семенники самцов крыс. Диазепам вводили внутрибрюшинно в физрастворе в дозе 5 мг/кг веса. Крыс декапитировали под наркозом через 0,5, 4, 24 и 72 часа. Определение активности фермента проводили флюорометрическим методом.

Результаты. Введение диазепама вызывало снижение активности КПН в гипофизе, гипоталамусе и надпочечниках, что согласуется с представлениями о стресс-протективном действии диазепама. Инъекция диазепама понижала активность КПН в четверохолмии, больших полушариях, мозжечке и гиппокампе через 4, 24 и 72 часа. Можно предположить, что уменьшение уровня холецистокининов и вещества Р в отделах мозга под действием бензодиазепинов вызвано снижением активности КПН. В семенниках активность КПН снижалась через 72 часа, что может говорить об участии фермента в обмене энкефалинов и др. пептидов.

Выводы. Изменение активности КПН может влиять на уровень нейропептидов и вовлекаться в механизмы действия диазепама.

119

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

Лабораторная диагностика

120

V Международный молодежный медицинский конгресс

А.В. Артемьева ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ПРОФИЛИРОВАНИЕ УРОВНЕЙ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ

МИКРО-РНК ПРИ ОПУХОЛЯХ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

(научный руководитель - д.м.н., проф. М.И. Зарайский)

Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. акад. И.П. Павлова Санкт-Петербург, Российская Федерация

Введение. МикроРНК (microRNA, miRNA) — класс некодирующих РНК, длина составляет 21-25 нуклеотидов, основной функцией является подавление трансляции мРНК, что приводит к остановке синтеза белка. МикроРНК контролируют множество биологических процессов: от развития органов, тканей и сигнальной трансдукции до заболеваний, вызванных опухолевыми процессами и вирусом иммунодефицита. Возможно их использование в диагностике и в качестве биомаркера рака. Для каждого типа рака экспрессированы как минимум две микроРНК. Это либо повышенная экспрессия отдельных микроРНК, при этом микроРНК функционирует как онкоген, либо сниженная экспрессия, тогда микроРНК выступает как ген, супрессирующий развитие опухоли.

Цель. Для различных видов рака щитовидной железы (РЩЖ) известен ряд микроРНК с характерным изменением экспрессии. Целью данного проекта является попытка формирования диагностической панели для дооперационной диагностики РЩЖ на основе выявления уровней экспрессии микроРНК при различных типах рака.

Материалы и методы. Исследуются экспрессии микроРНК 146b, 221, 222, 224, 155, 21 и 181b (ассоциированы с папиллярным раком), 192, 197, 328, 346 (ассоциированы с фолликулярным раком), 9, 10a, 124a, 127, 129, 137, 154, 224, 323, 370 (ассоциированы с медуллярным раком) и 26a, 30a-5p, 30d, 125b (ассоциированы с анапластическим раком). В качестве материала используются тонкоигольные аспирационные биоптаты щитовидной железы пациентов с подозрением на опухоль (тот же материал, что и для цитологического исследования) с последующей верификацией диагноза гистологическим методом. Группа сравнения планируется с тканью фолликулярной аденомы. Методом выбора является полимеразная цепная реакция в режиме реального времени с последующей идентификацией результатов с помощью высокоразрешающей кривой плавления.

Результаты. В зависимости от степени развития опухоли меняется и профиль экспрессии микроРНК. Повышением или понижением уровня микроРНК в образце является изменение значения в пять и более раз по отношению к нормальному (контрольному) образцу, соответственно. На данном этапе идет формирование банка генетического материала для различных видов РЩЖ.

Выводы. Существует уникальная закономерность экспрессии микроРНК в различных типах опухолей, а также на разных стадих ее развития. Использовать различные уровни экспрессии микроРНК можно не только для выявления границ нормальной и опухолевой ткани, но и для дифференцировки по гистопатологическому типу поражения внутри одной ткани, для определения степени злокачественности опухоли, а также для дифференциальной диагностики между первичной опухолью и метастазами. Уровень экспрессии микроРНК может стать новым биомаркером для диагностики опухолевого процесса и гистологической характеристики.

А.М. Купченко ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРОФЛОРЫ И

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЕЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ПРИ РАСПРОСТРАНЕННОМ ГНОЙНОМ ПЕРИТОНИТЕ

(научный руководитель - к.м.н., доц. В.А. Косинец)

Витебский государственный медицинский университет Витебск, Республика Беларусь

Введение. Перитонит является полимикробным заболеванием с участием широкого спектра микроорганизмов. Проведение рациональной антибактериальной терапии требует экспресс-диагностики микрофлоры, а также точного определения ее чувствительности к антибиотикам.

Цель. Определить эффективность тест-систем для идентификации и определения чувствительности микрофлоры при распространенном гнойном перитоните.

Материалы и методы. В Витебском государственном медицинском университете разработаны и внедрены в производство тест-системы для идентификации грамотрицательных микроорганизмов и определения их чувствительности к антимикробным препаратам «ИД-ЭНТ» и «АБ-ГРАМ(-)», для облигатно-

121

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

анаэробных микроорганизмов – «ИД-АНА» и «АБ-АН», соответственно. С их помощью проведены исследования перитонеального экссудата 92 пациентов с распространенным гнойным перитонитом.

Результаты. Тест-системы «ИД-ЭНТ», «ИД-АНА», «АБ-ГРАМ (-)» и «АБ-АН» позволяют сократить время исследования чувствительности к антибактериальным препаратам до 20 минут для 4 штаммов микроорганизмов, учет результатов – до 5 минут, обеспечивают назначение и проведение целенаправленной, эффективной антибактериальной терапии при распространенном гнойном перитоните.

Выводы. Тест-системы характеризуются большим разнообразием антибиотиков, простотой в эксплуатации и быстротой определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам.

Г. Сахаран Антифосфолипидный синдром В КЛИНИЧЕСКОЙ ПРАКТИКЕ

(научный руководитель - д.м.н. Т.В. Вавилова)

Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова Санкт-Петербург

Введение. Antiphospholipid antibodies (Abs) are acquired circulating immune-globulins and the principal ones are Lupus anticoagulant, Anticardiolipin Abs and Anti β2 glycoprotein 1 Abs .They’re directed against neutral and negative charged phospholipid protein complex are and may lead to Antiphospholipid Syndrome (APS), often also called Hughes syndrome. APS is an autoimmune acquired thrombophilia with hypercoagulable state and clinical manifestation (Deep Vein Thrombosis, Pulmonary Embolism, Arterial Thrombosis and/or pregnancy loss). The correct and in time diagnosis may help the patient to get prophylactic therapy against the complications which can occur & to save the life of the patient.

Цель. To use the international criteria of APS diagnosis in suspected patients.

Материалы и методы. In our study, we demonstrated two clinical cases of APS diagnosis and management. Результаты. Case 1: 31 years old woman with 2 episodes of Deep Vein Thrombosis+ Pulmonary Embolism

and 2 Miscarriages.

Diagnostic Criteria: Antβ2 GP1 Abs (71.7 MPL) , IgG ( 128.8 MPL) and Lupus anti-coagulate Ab. We repeated it twice after 24 months.

Case 2:55years old woman with 2 Transient Ischemic Attacks

Diagnostic Criteria: D-dimer (0.64 mkg/l),Factor Willibrand (165%), Factor VIII(179%)and anti-β2GP1 Ab. (>200MPL).

We repeated it twice after 3 months.

We used Sydney Diagnostic Criteria 2004 which Includes Clinical Picture and Laboratorical Parameters ( repeated twice) and were helpful for us to make APS diagnosis.

Выводы. In Clinical Practice, the diagnosis of APS is more depend on clinical lab test and we need the individual decision making according international Criteria.

И.В. Самусева ОЦЕНКА СПОСОБНОСТИ ИНТАКТНЫХ НЕЙТРОФИЛОВ К ОБРАЗОВАНИЮ

ВНЕКЛЕТОЧНЫХ ЛОВУШЕК В РАЗЛИЧНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВРЕМЕНИ ИНКУБАЦИИ.

(научный руководитель - член-корр. РАМН, д.м.н., проф. И.И. Долгушин)

Южно-Уральский государственный университет минздрава России Челябинск,Российская Федерация

Введение. В работе приводится сравнительная оценка нового разработанного метода изучения нейтрофильных внеклеточных ловушек (НВЛ) в агарозном геле.

Цель. Создать для нейтрофилов условия приближенные к физиологичным, сравнить новый метод с другими способами их обнаружения.

Материалы и методы. У 40 здоровых женщин репродуктивного возраста исследовали внеклеточные сети нейтрофильных гранулоцитов, выделенных из периферической крови и образованных нейтрофилами урогенитального тракта. Оценку проводили c помощью люминесцентной микроскопии.

Результаты. Количество НВЛ линейно зависит от времени инкубации и среды в которой их инкубируют.

122

V Международный молодежный медицинский конгресс

Выводы. Предложенная методика отличается от других рядом преимуществ. В агарозном геле хрупкие и быстро разрушающиеся структуры НВЛ способны сохраняться в течение всего времени исследования, что позволяет более полно оценить кинетику процесса формирования НВЛ.

К.Н. Карлышева РОЛЬ ПРОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ

МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СИНДРОМА И ЖИРОВОГО ГЕПАТОЗА

(научный руководитель - к.м.н., доц. И.А. Булатова)

ГБОУ ВПО ПГМА им. ак. Е.А.Вагнера Минздрава России Пермь, Российская Федерация

Введение. Метаболический синдром (МС) предшествует возникновению ряда серьёзных заболеваний, таких как сахарный диабет 2 типа, атеросклероз, сердечно-сосудистая патология, жировая болезнь печени, что приводит к инвалидизации населения.

Цель. Определить показатели АЛТ, ТГ, ЛПВП и глюкозу, а также интерлейкин-6 (ИЛ-6), фактор некроза опухоли (альфа-ФНО), макрофагальный хемоаттрактантный белок-1 (МХБ-1) в сыворотке крови больных МС и оценить взаимосвязь этих факторов.

Материалы и методы. Исследованы образцы сывороток крови 62 больных (25 - 60 лет) и 25 доноров (22-50 лет). Определяли уровни АЛТ, ТГ, глюкозы, ЛПВП, альфа-ФНО, ИЛ-6, МХБ-1.

Результаты. Уровни АЛТ, ТГ и глюкозы у пациентов были достоверно выше, чем у доноров: АЛТ– 33,7±19,86 и 16,54±7,45 мммоль/л соответственно (р=0,001), ТГ- 1,75±0,79 ммоль/л и 0,78±0,38 ммоль/л (р=0,001), глюкоза- 5,8±2.1ммоль/л и 4,41±0,78 ммоль/л (р=0,001). Уровень ЛПВП достоверно ниже: 1,22±0,22 ммоль/л и 1,61±0,20 ммоль/л (р=0,001). Уровни ИЛ-6, альфа-ФНО, МХБ-1 доствоверно выше, чем у доноров: ИЛ-6- 1,01(0;2,2) и 0(0;0) пг/мл, (р=0,01); альфа-ФНО- 1,1 (0;4) и 0(0;0) пг/мл, (р=0,01); МХБ-1- 209,2(174,6;224,2) и 175,1(136,3;184,7) пг/мл, (р=0,006). Обнаружены достоверные прямые взаимосвязи связи между ТГ и МХБ-1 (р=0,04), ИЛ-6 и альфа-ФНО (р=0,01).

Выводы. МС с жировым гепатозом печени сопровождается повышением уровня провоспалительных цитокинов в сыворотке крови, которые демонстрируют достоверные взаимосвязи с липидным спектром и синдромом цитолиза.

О.Г. Кубарев СТАНДАРТИЗАЦИЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКА КРОВИ

(научный руководитель - д.м.н., доц. Д.Ю. Соснин)

Пермская государственная медицинская академия им. акад. Е.А. Вагнера Пермь, Российская Федерация

Введение. Современной тенденцией развития гематологических исследований является внедрение компьютерных систем автоматического распознавания изображений и оценки морфологии клеток крови. Внедрение таких технологий предъявляет более высокие требования к качеству мазка крови.

Цель. Сравнить влияние средств малой лабораторной автоматизации на качество подготовки мазков

крови.

Материалы и методы. Проведен анализ мазков крови, выполненных 5 интернами ручным способом и на автоматическом приборе V-Sampler, компании West Medica. Использовались образцы ЭДТАстабилизированной венозной крови. Каждый интерн сделал по 10 мазков (5 ручным способом, 5 на приборе).

Результаты. Применение V-Sampler, позволило стандартизировать характеристики мазка крови, независимо от квалификации и опыта сотрудника лаборатории. При сравнение мазков, выполненных разными способами, коэффициенты вариации для ширины и длины были ниже (р < 0,001), при использовании V- Sampler. Сами мазки практически соответствовали эталонным характеристикам: начало мазка - 25±3 мм от края стекла; ширина - 19±2 мм; расстояние от бокового края стекла - 3±2 мм; длина - 40±7 мм. Оптимальным объемом крови для получения мазка требуемого качества является объем 4-5 мкл.

При оценке морфологии клеточных элементов в мазках, приготовленных на V-Sampler, выявлено более низкое содержание разрушенных лейкоцитов (р < 0,001), составившее 3,4±1,1% (M±SD).

Выводы. Применение аппарата V-Sampler позволяет приготовить мазок крови с характеристиками близкими к эталонному и низким содержанием разрушенных клеток.

123

«Санкт-Петербургские научные чтения – 2013»

П.В. Улитина РОЛЬ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА С

(научный руководитель - д.м.н., доц., А.П. Щекотова)

Пермская Государственная Медицинская Академия им.акад. Е.А. Вагнера Пермь, Российская Федерация

Введение. Введение. При вирусных гепатитах мембранодеструкция как патологическое явление реализуется через процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) клеточных мембран гепатоцитов, обуславливая механизм их цитолиза и некроза.

Цель. Цель. Исследовать показатели перекисного окисления липидов глутатионредуктазы (ГР), супероксидисмутазы (СОД), активности каталазы и концентрацию АлАТ в сыворотке крови больных ХГС и оценить взаимосвязь этих факторов.

Материалы и методы. Материалы и методы исследования. Исследованы образцы сыворотки крови пациентов ХГС (n=83, от 25 до 59 лет) и здоровых (n=26, от 26 до 57 лет). Определяли активность АлАТ, супероксиддисмутазы, глутатионредуктазы и каталазы.

Результаты. Результаты. У больных ХГС были выявлены повышения активности ГР, СОД и АлАТ в сравнении с группой здоровых (ГР - 30,45 ± 10,98 и 9,34±3,57 мкмоль/л/мин, р=0,001; СОД - 41,16 ± 13,34 и 27,75 ± 7,68 ед/л, р= 0,001; АлАТ - 78,16 ± 54,65 и 17,09 ± 8,41 ммоль/л, р=0,001) и

снижение активности каталазы (9,14 ± 4,68 и 27,38 ± 6,19 мкат/л, р=0,001). Обнаружены достоверные обратные взаимосвязи между показателями окислительного стресса ГР и каталазы (r= - 0,2; р=0,01), а также между АлАТ и каталазой (r= - 0,29; р=0,01).

Выводы. Выводы. У всех обследованных больных определялось повышение активности ГР, СОД, АлАТ и снижение активности каталазы, что указывает на облигатное участие оксидативного стресса в поражении гепатоцитов при ХГС. Обратные взаимосвязи ГР и каталазы, и АлАТ указывают на дисбаланс антиоксидантной системы, что может быть связано с гетерогенностью пациентов по уровню цитолиза.

Э.И. Рыткин ЛАБОРАТОРНЫЙ МОНИТОРИНГ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГЕПАРИНОТЕРАПИИ У

ПАЦИЕНТОВ С ОСТРЫМ КОРОНАРНЫМ СИНДРОМОМ

(научный руководитель - к.б.н., доц. Е.С. Зыкова)

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Москва, Российская Федерация

Введение. смертность пациентов с острым коронарным синдромом – 16.2%. Лечение предполагает использование нефракционированного и низкомолекулярного гепарина. Геморрагии и тромбоцитопении – побочные эффекты гепаринотерапии.

Цель. использование лабораторного мониторинга при приёме антикоагулянтных препаратов для уменьшения побочных эффектов гепаринотерапии.

Материалы и методы. в исследовании приняли участие 11 пациентов ГКБ №20 г. Москвы от 40 до 80 лет с острым коронарным синдромом. Пациенты были разделены на две группы, получающих: Эноксапарин - низкомолекулярный гепарин – 20 мг/сутки и «Арикстра» (Фондапарин) – 2,5 мг/сутки - селективный ингибитор активированного фактора (Xa) . Используя значение оптической плотности образца, определяли активность гепарина в анти-Ха единицах.

Результаты. активность препарата «Арикстра» (Фондапарин) в анти-Ха единицах составила 0.3-0.7 единиц/мл, эноксапарина 1-2 единицы/мл. Терапевтическую область применения составляют значения 0.3-0.7 единиц/мл анти-Ха активности, профилактическую область - 0.1- 0.3 единиц/мл. Показатель анти-Ха активности Эноксапарина превышает терапевтический, что свидетельствует о более высоком риске развития таких осложнений, как кровотечение и тромбоцитопения.

Выводы. лабораторный мониторинг эффективности антикоагулянтных препаратов позволяет осуществлять оптимальный индивидуальный подбор антикоагулянтов и минимизировать риск кровотечений и тромбоцитопений.

124

V Международный молодежный медицинский конгресс

125