2.6.4. Фотолябильность ферментов

Фотолябильность – чувствительность ферментов к действию ультрафиолетовых лучей. УФЛ вызывают фотоденатурацию белковых молекул и уменьшают активность ферментов. Это свойство ферментов используют в бактерицидном эффекте ультрафиолетовых ламп.

2.6.5. Зависимость активности ферментов от рН.

У всех ферментов есть определённый интервал рН, в котором активность фермента максимальна - оптимум рН. Для многих ферментов оптимум около 7. В то же время, для пепсина оптимальная среда 1-2, для щелочной фосфатазы около 9. При отклонении рН от оптимума активность фермента снижается, что видно из графика. Это свойство ферментов объясняется изменением ионизации ионогенных групп в молекулах фермента, что ведёт к изменению ионных связей в молекуле белковой молекулы фермента. Это сопровождается изменением конформации молекулы фермента, а это, в свою очередь, приводит к изменению его активности. В условиях организма рН- зависимость определяет максимальную активность ферментов. Данное свойство находит и практическое применение. Ферментативные реакции вне организма проводятся при оптимуме рН. При сниженной кислотности желудочного сока с лечебной целью назначают раствор НСl.

2.6. 6. Зависимость скорости ферментативной реакции от концентрации фермента и концентрации субстрата

Зависимость скорости реакции от концентрации фермента и концентрации субстрата (кинетика ферментативных реакций) представлена соответственно на графиках.

График 1 График 2

В ферментативной реакции выделяют скорости трёх составляющих этапов:

1. образование фермент-субстратного комплекса FS;

2. обратный распад фермент – субстратного комплекса;

3. распад фермент-субстратного комплекса с образованием продуктов реакции.

Скорость каждой из этих реакций подчиняется закону действующих масс:

V₁ = К₁ [F] ·[S]

V₂ = K₂ [FS]

V₃ = K₃ [FS]

В момент равновесия скорость реакции образования FSравна сумме скоростей его распада:V₁=V₂+V₃. Из трёх этапов ферментативной реакции наиболее важным и медленным является третий_, так как он связан с образованием продуктов реакции. По приведенной выше формуле найти скоростьV₃ невозможно, так как фермент- субстратный комплекс очень неустойчив и измерение его концентрации затруднено. В связи с этим, Л. Михаэлис, М.Ментен ввели константу Михаэлиса - Кmи преобразовали уравнение для измеренияV₃ в новое уравнение, в котором присутствуют реально измеримые величины. Ниже представлены два варианта данного уравнения

[F₀] – исходная концентрация фермента;

Кm– константа Михаэлиса.

Физический смысл Кm:Кm = (К₂+К₃) /К_1, т.е. она показывает соотношение констант скоростей распада фермент-субстратного комплекса и константы скорости его образования.

Уравнение Михаэлиса-Ментен является универсальным. Оно иллюстрирует зависимость скорости реакции от [F₀] от [S].

1. Зависимость скорости реакции от концентрации субстрата.Эта зависимость выявляется при малых концентрациях субстрата [S]<Km. В этом случае концентрацией субстрата в уравнении можно пренебречь и уравнение приобретает вид:.В данном уравненииK₃, [F₀], Km – константы и могут быть заменены новой константой К*. Таким образом, при малой концентрации субстрата скорость реакции прямо пропорциональна этой концентрацииV₃ = K* · [S].Эта зависимость соответствует первому участку графика 2.

2. Зависимость скорости от концентрации ферментапроявляется при высокой концентрации субстрата.S>Km. В этом случае можно пренебречьKmи уравнение преобразуется в следующее:.Таким образом, при высокой концентрации субстрата скорость реакции определяется концентрацией фермента и достигает максимального значенияV₃ = K₃[F₀]=V_max. (третий участок графика 2).

3. Уравнение позволяет определить численное значение Kmпри условии. В этом случае оно приобретает вид:, откуда следует, чтоKm=[S]

Таким образом, Кmчисленно равна концентрации субстрата при скорости реакции, равной половине максимальной. Кmявляется очень важной характеристикой фермента, она измеряется в молях (10^-2– 10^-6моль) и характеризуют специфичность фермента: чем нижеKm, тем выше специфичность фермента.

Графическое определение константы Михаэлиса возможно на графике зависимости скорости ферментативной реакции от концентрации фермента (слева).

Удобнее использовать график, представляющий прямую линию. Такой график предложен Лайнуивером – Берком (график двойных обратных величин), который соответствует обратному уравнению Михаэлиса – Ментен (справа)

.