2.6.7. Зависимость скорости ферментативных реакций от присутствия активаторов и ингибиторов.
2.6.7.1. Влияние активаторов ферментов
Активаторы – вещества, повышающие скорость ферментативных реакций. Различают специфические активаторы, повышающие активность одного фермента (НСl- активатор пепсиногена) и неспецифические активаторы, увеличивающие активность целого ряда ферментов (ионыMg– активаторы гексокиназы, К,Na–АТФ-азы и ряда других ферментов). В качестве активаторов могут служить ионы металлов, метаболиты, нуклеотиды.
Механизм действия активаторов может быть различным.
Достраивание активатором активного центра фермента, в результате чего облегчается взаимодействие фермента с субстратом. Таким механизмом обладают в основном ионы металлов.
Аллостерический активатор взаимодействует с аллостерическим участком (субъединицей) фермента, через его изменения опосредованно изменяет структуру активного центра и увеличивает активность фермента. Аллостерическим эффектом обладают метаболиты ферментативных реакций, АТФ.
Аллостерический механизм может сочетаться с изменением олигомерности фермента. Под действием активатора происходит объединение нескольких субъединиц в олигомерную форму, что резко увеличивает активность фермента. Например, изоцитрат является активатором олигомерного фермента ацетил-КоА карбоксилазы.
Фосфолирирование - дефосфолирирование ферментов относится к обратимой модификации ферментов. Присоединение Н3РО4чаще всего резко увеличивает активность фермента. Например, два неактивных димера фермента фосфорилазы соединяются с четырьмя молекулами АТФ и образуют активную тетрамерную фосфорилированную форму фермента. Фосфолирирование ферментов может сочетаться с изменением их олигомерности. В некоторых случаях фосфорилирование фермента, наоборот, снижает его активность (например, фосфорилирование фермента гликогенсинтетазы)
Частичный протеолиз (необратимая модификация). При данном механизме от неактивной формы фермента (профермента) отщепляется фрагмент молекулы, блокирующий активный центр фермента. Например, неактивный пепсиноген под действием HCLпереходит в активный пепсин.
2.6.7.2. Влияние ингибиторов ферментов
Ингибиторы – вещества, понижающие активность фермента. Выделяют различные виды ингибиторов.
По специфичностивыделяют специфичные и неспецифичные ингибиторы
По обратимостиэффекта различают обратимые и необратимые ингибиторы.
По месту действиявстречаются ингибиторы, действующие на активный центр и вне активного центра.
По механизму действияразличают конкурентные и неконкурентные ингибиторы.
Конкурентные ингибиторыимеют структуру, близкую к структуре субстрата. В силу этого ингибитор и субстрат конкурируют за связывание активного центра фермента. Конкурентное ингибирование - это обратимое ингибирование Эффект конкурентного ингибитора может быть уменьшен путём повышения концентрации субстрата реакции
Примером конкурентного ингибирования может служить угнетение активности сукцинатдегидрогеназы, катализирующей окисление дикарбоновой янтарной кислоты, дикарбоновой малоновой кислотой, сходной по структуре с янтарной кислотой.
Принцип конкурентного ингибирования широко используется при создании лекарственных средств. Например, сульфаниламидные препараты имеют структуру, близкую к структуре парааминобензойной кислоты, необходимой для роста микроорганизмов. Сульфаниламиды блокируют ферменты микроорганизмов, необходимые для усвоения парааминобензойной кислоты. Некоторые противоопухолевые препараты являются аналогами азотистых оснований и, тем самым, ингибируют синтез нуклеиновых кислот (фторурацил).
Графически конкурентное ингибирование имеет вид, представленный на рисунке.
Неконкурентные ингибиторыструктурно не схожи с субстратами реакций и поэтому не могут вытесняться при высокой концентрации субстрата. Существует несколько вариантов действия неконкурентных ингибиторов:
Блокирование ингибитором функциональной группы активного центра фермента и, вследствие этого, уменьшение активности. Например, активность SН - групп могут уменьшать тиоловые яды обратимо (соли металлов, ртути, свинца) и необратимо (монойодацетат). Эффект ингибирования тиоловых ингибиторов может быть уменьшен введением добавочных веществ, богатыхSHгруппами (например, унитиол). Существуют сериновые ингибиторы, блокирующие ОН - группы активного центра ферментов. Таким эффектом обладают органические фосфофторсодержащие вещества. Эти вещества могут, в частности, ингибировать ОН - группы в ферменте ацетилхолинэстеразе, разрушающей нейромедиатор ацетилхолин.
Блокирование ингибитором ионов металлов, входящих в состав активного центра ферментов. Например, цианиды блокируют атомы железа, ЭДТА (этилендиаминтетраацетат) блокирует ионы Са 2+,Mg2+.
Аллостерический ингибитор взаимодействует с аллостерическим участком, опосредованно через него по принципу кооперативности, меняя структуру и активность каталитического участка. Графически неконкурентное ингибирование имеет вид:
Как видно из рисунка, максимальная скорость реакции при неконкурентном ингибировании не может быть достигнута путём повышения концентрации субстрата.