22.3. Хроматографические параметры

Расположение разделяемых веществ в виде отдельных зон вдоль колонки называют внутренней хроматограммой,а графическое изо­бражение состава элюата(подвижной фазы, содержащей разделённые вещества), выходящего из колонки, получаемое, например, с помо­щью самописца - внешней хроматограммой.

Основные характеристики внешней хроматограммы, полу­чаемой при элюентном хроматографическом анализе

Часть хроматограммы, соответствующая выходу из колонки чистого элюента (например, газа-носителя), называется нулевой ли­нией.Часть хроматограммы, соответствующая выходу из колонки элюента вместе с компонентом разделяемой смеси, называется пиком. Для описания хроматографического пика используются следующие характеристики (рис. 22.1).

g / e	\g- \ Т7
e /	\ fh \
нулевая линия //
м	vvb
c w d

Рис. 22.1.Характеристики хроматографического пика

Отрезок нулевой линии, заключенный между крайними точками пика (в данном случае А и В), называется основанием пика.Часть основания пика, заключённая между точками пересечения касатель­ных, проведённых к точкам перегиба на сторонах пика(G иG'), с ну­левой линией (точкиC иD), называется шириной пика(w - от англ.width). Расстояние от вершины пика до его основания, измеренное па­раллельно оси ординат, называется высотой пика(h - от англ.hight). Отрезок прямой, проведённой параллельно нулевой линии на полови­не высоты пика, заключённый между точками её пересечения с каса­тельными (в данном случае точкамиE иF), называется шириной пи­ка на половине высоты(w₀,₅).

Хроматографические характеристики, используемые для идентификации веществ (характеристики удерживания)

Время от момента ввода пробы до момента регистрации макси­мума пика называется временем удерживания(t_R).

tR= tm+ ts ^moblle ► *

•m

stationary t_s

В идеальном случае время удерживания не зависит от концен­трации вещества, но зависит от его природы, а также от природы под­вижной и неподвижной фазы и условий хроматографирования. Время удерживания вещества зависит от упаковки сорбента и поэтому может изменяться при переходе от одной колонки к другой. Более надёжной характеристикой является исправленное время удерживания(t R), которое равно разности между временем удерживания данного веще­ства и несорбируемого компонента(to). Посколькуto =t_m, тоt R =t_S.

Объём подвижной фазы, который необходимо пропустить через колонку с определённой скоростью для того, чтобы элюировать веще­ство, называется удерживаемым объёмом(V_R). Аналогично понятию исправленное время удерживания существует понятие исправленный удерживаемый объём(VR)

R

Vr =tR •F

V

m

VR =(tR -tm)F =V

где F - объёмная скорость подвижной фазы (см³/мин)

Отношение равновесной концентрации вещества в неподвижной фазе (C_s) к его равновесной концентрации в подвижной фазе (С^ на­зывается коэффициентом распределения(D).

Удерживаемый объём связан с коэффициентом распределения уравнением, называемым основным уравнением хроматографии:

V

Vm +DVs

(либо

⁾

R

VR =DV_S

Произведение коэффициента распределения на соотношение объёмов неподвижной и подвижной фазы называется коэффициен­том ёмкости колонки (k')

Хроматографические характеристики, используемые для количественного определения веществ

Приёмы количественного определения в хроматографии

В качестве аналитического сигнала в хроматографии использу­ют высотуили площадь хроматографического пика,которые про­порциональны содержанию вещества в хроматографической зоне.

Приёмы количественного определения, используемые в хрома- тографических методах, приведены в табл. 22.3.

Табл. 22.3.

Метод	Принцип метода
нормировки	Используется для определения относительного со­держания компонентов в анализируемой смеси. Мо­жет быть применён лишь в том случае, когда на хро- матограмме присутствуют пики всех компонентов смеси. S v f V S V Л Л Л Ю; = илиЮ v = , ^i XS ^v ZfiSi где f - поправочные коэффициенты, учитывающие неодинаковую чувствительность детектора к различ­ным компонентам смеси
внешнего стандарта	Аналитическим сигналом является высота (площадь) пика определяемого вещества
внутреннего стандарта	Аналитическим сигналом является отношение высот (площадей) пиков определяемого вещества и внут­реннего стандарта.

Внутренний стандарт представляет собой специально добавляе­мое к анализируемой пробе в точно измеренном количестве вещество, свойства которого близки к свойствам определяемого вещества. Ве­щество, взятое в качестве внутреннего стандарта:

• не должно химически взаимодействовать с компонентами анализируемой смеси, с неподвижной или подвижной фазой;

• должно отсутствовать в исходной анализируемой смеси;

• давать пик, находящийся на хроматограмме в непосредст­венной близости от пиков определяемых веществ, но не накла­дывающийся на них и на пики других соединений.

Концентрацию внутреннего стандарта выбирают таким образом, чтобы высота (площадь) пика внутреннего стандарта была соизмери­ма с высотой (площадью) пика определяемого вещества (рис. 22.3).

растворитель

В методе внешнего и внутреннего стандарта используются одни и те же приёмы расчёта содержания вещества (метод градуировочного графика и др.). Основное различие заключается в характере исполь­зуемого аналитического сигнала. Метод внутреннего стандарта обла­дает большей надёжностью и даёт более воспроизводимые результа­ты, особенно в случае сложной пробоподготовки.