24.2.2. Анализ плоскостной хроматограммы

Разделяемые компоненты обра­зуют на хроматографической пластин­ке или полоске хроматографической бумаги отдельные зоны (пятна). При­мерный вид плоскостной хромато- граммы показан на рис. 24.3. Зоны ок­рашенных веществ можно обнаружить визуально. Для обнаружения неокра­шенных соединений используют фи­зические (например, облучение УФ- светом), химические (обработка хро­матограммы различными реагентами- проявителями), а в некоторых случаях и биологические методы.

фронт элюэнта

Q

L

0

^x2

^x1

линия старта

Рис. 24.3.Примерный вид плоско стной хроматограммы

Некоторые из реагентов, исполь­зуемых для проявления хроматограмм, показаны в табл. 24.2.

Табл. 24.2.

Некоторые реагенты-проявители, используемые в плоскостной хроматографии

Реагент	Обнаруживаемые вещества	Аналитический эффект
Нингидрин	Аминокислоты, пептиды, первичные амины	Синее (пурпурное, коричневое и др.) окрашивание
Реактив Драгендорфа K[Bil4]	Третичные амины и чет­вертичные аммониевые соединения	Тёмно-оранжевые пятна на жёл­том фоне
Раствор SbCl3 в хлороформе	Стероиды	Фиолетовое окрашивание
FeCl3	Фенолы, легкоокисляю- щиеся вещества (аналь­гин, амидопирин и др.)	Сине-фиолетовое, красно- фиолетовое и др. окрашивание на жёлтом фоне
2,4-Динитро- фенилгидразин	Альдегиды, кетоны	Жёлтое окрашивание, переходя­щее в красно-коричневое при об­работке 10%-ным NaOH

Положение отдельных хроматографических зон на хромато- грамме характеризуют с помощью величины R_f, равной отношению расстояния, пройденного зоной вещества от стартовой линии до цен­

тра зоны (x), к расстоянию от стартовой линии до границы фронта растворителя к концу опыта(L)

x

R_f =

L

Величина R_f может принимать значения от 0 до 1. ЕслиR_f = 0, то вещество остаётся на старте, еслиR_f = 1, то оно поднимается с фрон­том растворителя. ВеличинаR_f является качественной хроматографи- ческой характеристикой вещества. Она зависит от природы вещества, подвижной и неподвижной фазы, условий хроматографирования и, в определённых пределах, не зависит от концентрации вещества.

Подвижность разделяемых веществ можно также сравнить с подвижностью вещества, принятого за стандарт

Величина R_f связана с коэффициентом распределения вещества(D) и коэффициентом емкости неподвижной фазы по отношению к данному веществу(k') следующими уравнениями:

V D = ^mVs

f 1 -ll V ^Rf J

k ' =^1^-^Rf Rf

Рис. 24.4.Расчёт эффектив­ности разделения в плоскост­ной хроматографии

Для того чтобы оценить эффектив­ность разделения в плоскостной хрома­тографии, измеряют расстояние от стар­товой линии до нижнего края пятна дан­ного вещества (x') и расстояние от ниж­ней до верхней границы этого пятна(w) - рис. 24.4. Число теоретических тарелок(N) и высоту эквивалентную теоретиче­ской тарелке(H) рассчитывают по фор­мулам:

	L
	H = —
	N

Коэффициент разделения (а) и раз­решение (R_S) в плоскостной хроматогра­фии рассчитывают следующим образом: