24.2.3. Практическое применение

Плоскостная хроматография используется, главным образом, для обнаружения и идентификации веществ.

г> ч.У о о		о • V /

окраска зоны вещества либо появление окраски при взаимодействии с реагентом-проявителем

использование других методов анализа

/

4 2

PPM

о

положение зоны вещества (величина Rf)

⁴Щ

ОБНАРУЖЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВЕЩЕСТВ

использование

стандартных

веществ

lgC

С целью количественного определения веществ тонкослойную и бумажную хроматографию применяют значительно реже.

24.3. Колоночная жидкостная хроматография

В колоночной жидкостной хроматографии сорбент находится в стеклянной или металлической трубке (колонке).

В классическом вариантеколоночной хроматографии исполь­зуются сорбенты с диаметром частиц более 100 мкм. Колонка может иметь длину до нескольких метров. Элюент продвигается по колонке под действием силы тяжести.

В высокоэффективной жидкостной хроматографии(ВЭЖХ) используются сорбенты, обладающие особыми свойствами (однород­ность частиц, ненабухаемость и т.д.). Диаметр частиц этих сорбентов не превышает 50 мкм. Часто в ВЭЖХ применяют сорбенты с различ­ными привитыми группами (см. рис. 24.1). Скорость движения под­вижной фазы и эффективность разделения в ВЭЖХ значительно вы­ше, чем в классическом варианте хроматографии.

24.3.1. Устройство жидкостного хроматографа

Основные узлы жидкостного хроматографа показаны на рис.

24.5.

Ввод пробы

Рис. 24.5.Принципиальная схема жидкостного хроматографа

Подвижная фаза подаётся в колонку с помощью насоса. Блок подачи элюента может включать в себя также систему дегазации, уст­ройство для градиентного элюирования, измерители давления. До по­падания в насос подвижная фаза должна быть профильтрована и освобождена от растворённых в ней газов("дегазирована"), так как пузырьки газа при попадании в колонку приводят к снижению её эф­фективности, а при попадании в детектор вызывают беспорядочные колебания нулевой линии.

Ввод пробы в жидкостный хроматограф может проводиться с помощью петлевого дозатора, микрошприца (роль шприца может вы­полнять сам насос) и др.

Хроматографические колонки в ВЭЖХ, в отличие от газохрома- тографических колонок, прямые. Они имеют длину 10 - 30 см и внут­ренний диаметр 4 - 6 мм, а в микроколоночных хроматографах, соот­ветственно, 5 - 7 см и 1-2 мм. Корпус колонки представляет собой ци­линдрическую трубку, изготовленную из стекла, нержавеющей стали или полимерного материала. На верхнем и нижнем концах колонки расположены фильтры, представляющие собой диски из пористой не­ржавеющей стали. Назначение фильтров - удерживание сорбента в колонке и задержка механических примесей, которые могут находить­ся в подвижной фазе.

В табл. 24.3 перечислены детекторы, наиболее часто используе­мые в ВЭЖХ.

Табл. 24.3

Характеристика некоторых детекторов, используемых в жидкостных хроматографах

Детектор	Измеряемый сигнал	Определяемые вещества
дифференциальный рефрактометр	разность показателей прелом­ления элюата и элюента	универсальный
УФ-детектор с фик­сированной длиной волны (254 нм)	разность между поглощением элюата и элюента при 254 нм	вещества, поглощающие электромагнитное излу­чение с длиной волны 254 нм
спектрофотометри- ческий	разность между поглощением элюата и элюента при вы­бранной длине волны	вещества, поглощающие излучение с выбранной длиной волны
флуоресцентный	интенсивность испускаемого света	вещества, обладающие флуоресценцией
кондуктометриче- ский	низкочастотная электропро­водность элюата	ионы
потенциометриче- ский	разность потенциалов ионо- селективного электрода и электрода сравнения	ионы
вольтамперометри- ческий	сила тока при постоянном по­тенциале электродов	вещества, способные к электрохимическому окислению или восста­новлению