25.Чисті культури мікроорганізмів. Методи виділення чистих культур аеробних бактерій та принципи їх ідентифікації.

Чистої культурою називається популяція бактерій одного виду або одного різновиду, вирощена на живильному середовищі. Багато видів бактерій підрозділяють за однією ознакою на біологічні варіанти - біовари. Біовари, що розрізняються за біохімічними властивостями, називають хемоварамі, за антигенними властивостями - сероварами, по чутливості до фагу - фаговаров. Культури мікроорганізмів одного і того ж виду, або биовара, виділені з різних джерел або в різний час з одного і того ж джерела, називають штамами, які зазвичай позначаються номерами або будь-якими символами. Чисті культури бактерій в діагностичних бактеріологічних лабораторіях отримують з ізольованих колоній, пересіваючи їх петлею в пробірки з твердими або, рідше, рідкими живильними середовищами.

Колонія являє собою видиме ізольоване скупчення особин одного виду мікроорганізмів, що утворюється в результаті розмноження однієї бактеріальної клітини на щільному живильному середовищі (на поверхні або в глибині її). Колонії бактерій різних видів відрізняються один від одного по своїй морфології, кольором та іншими ознаками.

Чисту культуру бактерій отримують для проведення діагностичних досліджень - ідентифікації, яка досягається шляхом визначення морфологічних, культуральних, біохімічних та інших ознак мікроорганізму.

Морфологічні та тинкторіальних ознаки бактерій вивчають при мікроскопічному дослідженні мазків, забарвлених різними методами, і нативних препаратів.

Культуральні властивості характеризуються поживними потребами, умовами і типом росту бактерій на щільних і рідких поживних середовищах. Вони встановлюються по морфології колоній і особливостям зростання культури.

Біохімічні ознаки бактерій визначаються набором конститутивних і індуцибельних ферментів, властивих певного роду, виду, варіанту. В бактеріологічній практиці таксономическое значення мають найчастіше сахаролитические і протеолітичні ферменти бактерій, які визначають на диференційно-діагностичних середовищах.

При ідентифікації бактерій до роду та виду звертають увагу на пігменти, що забарвлюють колонії і культуральне середовище в різноманітні кольори. Наприклад, червоний пігмент утворюють Serratia marcescens, золотистий пігмент - Staphylococcus aureus (золотистий стафілокок), синьо-зелений пігмент - Pseu-domonas aeruginosa.

Для встановлення биовара (хемовара, серовар, фаготип) проводять додаткові дослідження по виялвеніб відповідного маркера - визначення ферменту, антигену, чутливості до Фанам.

Методи виділення чистих культур бакте¬рій.

Універсальним інструментом для виробництва посівів є бактеріальна петля. Крім неї, для посіву уколом застосовують спеціальну бактеріальну голку, а для посівів на чашках Петрі - металеві або скляні шпателі. Для посівів рідких матеріалів поряд з петлею використовують пастерівські і градуйовані піпетки. Перші попередньо виготовляють з стерильних легкоплавких скляних трубочок, які витягають на полум'я у вигляді капілярів. Кінець капіляра відразу ж запаюють для збереження стерильності. У пастерівських і градуювальних піпеток широкий кінець закривають ватою, після чого їх поміщають в спеціальні пенали або обгортають папером і стерилізують.

При пересеве бактеріальної культури беруть пробірку в ліву руку, а правою, обхопивши ватяну пробку IV і V пальцями, виймають її, проносячи над полум'ям пальника. Утримуючи іншими пальцями тієї ж руки петлю, набирають нею посівний матеріал, після чого закривають пробірку пробкою. Потім в пробірку зі скошеним агаром вносять петлю з посівним матеріалом, опускаючи її до конденсату в нижній частині середовища, і зигзагоподібним рухом розподіляють мате ріал по скошеної поверхні агару. Вийнявши петлю, обпалюють край пробірки і закривають її корком. Петлю стерилізують в полум'ї пальника і ставлять в штатив. Пробірки з посівами надг підписується, вказуючи дату посіву і характер посівного матеріалу (номер дослідження або назва культури).

Посіви «газоном» виробляють шпателем на поживний агар в чашці Петрі. Для цього, відкривши лівою рукою кришку, петлею або піпеткою наносять посівний матеріал на поверхню поживного агару. Потім проводять шпатель через полум'я пальника, остуджують його про внутрішню сторону кришки і розтирають матеріал по всій поверхні середовища. Після інкубації посіву з'являється рівномірний суцільний ріст бактерій.

26.Клостридії ботулізму: морфологія,культуральні властивості_?токсиноутворення, їх значен­ня для діагностики. Загальна характеристика захворювання. Фармакологічні препарати для діагностики,лікування та профілактики.

Clostridium botulinum, анаеробна, здатна до спороутворення грампозитивна рухома паличка, продукує екзотоксин- ботулотоксин, що є найсильнішою біологічною отрутою. Субтермінальні розташовані спори, тому палички мають вид теннісної ракетки. Капсулу не утворюють, мають перитрихи.

Відомо 8 серотипів клостридій ботулізму (А-О), які мають антигенні відмінності. Захворювання в людей здебільшого спричиняє ботулотоксин типів А, В, Е, F.

Патогенність: екзотоксин, найсильніша біологічна отрута, має нейротоксичну та гемаглютинюючу дію, резистентний до нагрівання, ксилоти, високим концентраціям солі, заморажування, травних ферментів.

Основним резервуаром збудника є травоїдні тварини. Потрапляючи в довкілля з випорожненнями тварин, вегетативні форми перетворюються в спори, які в ґрунті не втрачають життєздатності роками. Захворювання найчастіше пов'язане з вживанням продуктів домашнього консервування (гриби, м'ясо, риба, салати, овочі). Зрідка ботулізм виникає після споживання забрудненої спорами ковбаси чи шинки. Ботулотоксин з їжею потрапляє в шлунок і кишки, де не руйнується травними ферментами. Інкубаційний період триває від 2-3 год до 10 діб, у середньому - 12-24 год . Всмоктавшись у кров, він уражає нервову систему, зокрема, рухові нейрони довгастого і спинного мозку. Токсин блокує передачу збудження з нервових закінчень на м'язові волокна. Внаслідок цього виникають паралічі різних м'язів. Відзначаються сухість слизової оболонки порожнини рота, біло-жовтий або коричневий наліт на язиці, явища фарингіту. Живіт здутий, гази відходять погано. Розлади ковтання і дихання нерідко призводять до аспіраційної пневмонії, асфіксії і смерті. Хворий на ботулізм не становить небезпеки щодо зараження інших людей.

Культивування: Анаероб, темпер. 25-35 С, pH 7,2-7,4. Сер-ща Кітта-Тароцці, Хоттінгера. На кров*яному агарі невеликі прозорі колонії, оточені зоною гемолізу, у високому стовпчику цукрового агару мають вигляд пушиноу чи зерен чечевиці.

Ферментують глюкозу, галактозу, гліцерин, мальтозу, сахарозу до кислоти та газу, віділяють H2S, не утвор. індол.

Біологічно: р-ція нейтралізації токсина антитоксином на тваринах

Серологія: РНГА, ІФА

Лікування: Антитоксичні протиботуліністичні гетерологічні сироватки та гомологічні іммуноглобуліни

Профілактика: Дотримання правил приготування продуктів, перш за все консервів. Специфічно: тетра- та трианатоксин, в склад яких входять ботуліністичні анатоксини типів А, В, Е.

Ботулізм - гостре інфекційне захворювання, що характеризується інтоксикацією організму з переважним ураженням центральної нервової системи. Хвороба виникає в результаті вживання харчових продуктів, що містять токсини Clostridium botulinum.

Таксономія. Збудник ботулізму відноситься до відділу Firmicutes, роду Clostridium.

Морфологічні та тинкторіальних властивості. C.botulinum - грампозитивні палички з закругленими кінцями, утворюють спори і мають вигляд веретена. Капсулою не володіють, перитрихи.

Культуральні властивості. Строгий анаероб. Оптимальними для його зростання є температура 30С. На кров'яному агарі утворює невеликі прозорі колонії. У стовпчику цукрового агару можна виявити R-форми форми зерен сочевиці і S-форми - пушинок.

Біохімічна активність. Виділяють 4 групи: бактерії I групи - виражені протеолітичні властивості, гідролізують желатину, ферментують ГЛК. і мальтозу; II групи - проявляють сахаролитической активність, протеолітичної - немає. III група - проявляють ліпазних активність, гидролизуют желатину. VI - гидролизуют желатину, не виявляють сахаролитических властивостей.

Всі типи утворюють желатинази, лецитиназу, H2S.Бактеріі типу А, В, Е, F - ферментують ГЛК., Фруктозу, мальтозу, сахарозу. Типу С, D - ГЛК, мальтозу.

Антигенні властивості. Є групоспецифічні жгутикові - Н і типоспецифічні О-АГ бактерій, не виявляють токсичних властивостей. За структурою екзотоксинів бактерії поділяють на 8 сероварів: А, В, С1, С2, D, E, F і G.

Фактори патогенності. Виділяє екзотоксин, найсильніший з усіх біологічних отрут. Ботулинический екзотоксин має нейротоксическим дією. Його особливістю є висока стійкість до нагрівання (зберігається протягом 10-15 хв при 100 ° С), до кислого середовища, високих концентрацій кухонної солі, заморожування, травних ферментів.

Резистентність. Спори мають дуже великий резистентністю до високої температури (витримують кип'ятіння протягом 3-5 год).

Епідеміологія. Широко поширений в природі. Його виявляють в організмі тварин, риб, звідки він потрапляє в грунт і воду. У грунті C.botulinum довгий час зберігається у вигляді спор і навіть може розмножуватися, що дозволяє віднести ботулізм до сапронозним інфекцій. З грунту збудник потрапляє в харчові продукти і при наявності анаеробних умов розмножується там і виділяє екзотоксин. Шлях зараження ботулізмом - харчової. Найчастіше фактором передачі цієї інфекції є консерви (як правило, домашнього приготування) - грибні, овочеві, м'ясні, рибні.

Патогенез. Ботулінічний токсин потрапляє з їжею в шлунково-кишковому тракті. Стійкий до дії травних ферментів і соляної кислоти, токсин всмоктується через стінку кишечника в кров і зумовлює тривалу токсінеміі. Токсин зв'язується нервовими клітинами і блокує передачу імпульсів через нервово-м'язові синапси. В результаті розвивається параліч м'язів гортані, глотки, дихальних м'язів, що призводить до порушення ковтання і дихання; спостерігаються зміни з боку органу зору.

Клініка. Інкубаційний період триває від 6-24 годин до 2-6 днів і більше. Чим коротший інкубаційний період, тим важче протікає хвороба. Зазвичай хвороба починається гостро, але температура тіла залишається нормальною. Можуть бути різні варіанти ботулізму - з переважанням симптомів ураження шлунково-кишкового тракту, зору, ковтання, мови або дихальної функції. У першому випадку хвороба починається з появи сухості в роті, нудоти, блювоти, проносу, в другому - початкові прояви хвороби пов'язані з порушеннями з боку зору (зниження гостроти зору, двоїння). В результаті паралічу м'язів гортані з'являється осиплість, а потім голос пропадає.

Імунітет. Після перенесеної хвороби імунітет не формується. Однак введення ботулинических анатоксинів створює міцний штучний варіантоспеціфіческій антитоксичний імунітет.

Лабораторна діагностика. Досліджують промивні води шлунка, блювотні маси, залишки їжі, кров. Застосовують бактеріологічний метод, біологічний (реакцію нейтралізації токсину антитоксином), за допомогою реакції зворотної непрямої гемаглютинації, і серологічний (РПГА) методи, що дозволяють виявити в досліджуваному матеріалі ботулінічний токсин.

Лікування. Антитоксичні Протиботулінічні гетерологічние сироватки і гомологічні імуноглобуліни.

Профілактика. Дотримання правил приготування продуктів, домашніх консервів. Для специфічної активної профілактики ботулізму розроблені і застосовуються за показаннями тетра-і тріанатоксіни, до складу яких входять ботулінічним анатоксини типів А, В і Е. Для екстреної пасивної профілактики використовують Протиботулінічні антитоксичні сироватки.