Основні види барвників, що застосовуються в мікробіологічній практиці:

Дають     наступне      забарвлення
червоне	голубе (синє)	фіолетове	жовто-коричневе	зелене
фуксин основний, нейтральний червоний, конго червоний	метиленовий та толуїдиновий синій	генціанвіолет, метиленовий фіолетовий	хризоїдин, везувін	брильянтовий зелений, малахітовий зелений

Особливості різних видів мікроскопії

Імерсійна система	Темно-польна мікроскопія	Фазово-контрастна мікроскопія	Люмінес-центна мікроскопія	Електронна мікроскопія
	Об‘єкт досліджується при боковому освітленні.  Використовують для дослідження рухливості мікроорганізмів.	Можна розглядати живі клітини (бактерії).  Не збільшує роздільної здатності, але дозволяє вивчити нові деталі внутрішньої структури бактерійної клітини, дослідити окремі стадії її розвитку, поділ, вплив хіміотерапевтичних препаратів.	Базується на використанні явища флюоресценції Переваги: кольорове зображення, висока контрастність, можливість досліджувати як живі, так і вбиті мікроорганізми.	Збільшене зображення отримують за допомогою потоку електронів. Переваги: висока роздільна здатність, збільшення від 20 тис.  до 5 млн. разів.

80.Реакція з міченими антитілами та антигенами у вірусологи. Реакція імунофлюоресценції (ріф), реактиви.

Реакція імунної флюоресценції, або РІФ (англ. immunofluorescence reaction) — один із методів мікробіологічної діагностики інфекційних хвороб, а саме імунохімічний метод.

Він заснований на виявленні антигенів збудника за допомогою мічених специфічних сироваток. Використовують сироватки, мічені флюорохромами. В основі реакції лежить утворення специфічного комплексу антиген-антитіло, який виявляють за допомогою люмінісцентного мікроскопа (УФО).

Розрізняють:

• пряму (АГ-АТ-флюорохром) ПІФ

• непряму (АГ-АТ-АнтиIg-флюорохром) РНІФ

У прямій — використовується біопсіний матеріал обстежуваного хворого. У цьому випадку безпосередньо специфічне антитіло мічене флюорохромом, і реакція проходить в один етап, що значно скорочує терміни дослідження.

у непрямій — використовується сироватка хворого. У цьому випадку специфічне антитіло не має мітки. Для виявлення комплексу антиген-антитіло, що утворився на першому етапі, використовують інші мічені антитіла, специфічні до конкретних антитіл.

Реакції, в яких приймають участь мічені антигени або антитіла (імунофлюоресценції, радіоімунний та імуноферментний методи) по своїй чутливості перевершує всі серологічні реакції.

Цей метод використовується для експрес-діагностики. З його допомогою можна виявляти як мікробні антигени, так і антитіла.

Прямий метод РІФ – імунна реакція взаємодії антитіл з антигенами, причому антитіла мітять флюорохромом – речовиною, здатним при потраплянні світла певної довжини хвилі випускати кванти світла також певної довжини хвилі. Особливість постановки цього методу полягає в необхідності видалення непрореагіровавшіх компонентів, щоб виключити виявлення неспецифічного світіння. Для цього проводять відмивання від непрореагіровавшіх антитіл. Результати оцінюють за допомогою люмінесцентного мікроскопа. Бактерії в мазку, оброблені такий люминесцирующей сироваткою, світяться на темному фоні по периферії клітини.

Непрямий метод РІФ використовується частіше попереднього. Ця реакція проводиться в два етапи. На першому етапі антигени взаємодіють з відповідними антитілами, утворюючи імунні комплекси. Всі компоненти, що не прореагували (тобто не в складі імунних комплексів), мають бути видалені відмиванням. На другому етапі утворився комплекс антиген-антитіло виявляється за допомогою флюорохромірованной антіглобуліновой сироватки. У результаті утворюється комплекс мікроб + антимікробні кролячі антитіла + антитіла до імуноглобулінів кролика, мічені флюорохромом. Результати оцінюють за допомогою люмінесцентного мікроскопа.

ІФА знайшов широке використання у різних галузях медицини і біології завдяки відносної простоті і високої чутливості методу. ІФА успішно застосовується для:

• масової діагностики інфекційних захворювань (виявлення різних специфічних антигенів чи антитіл до них);

• виявлення та засобами визначення рівня гормонів і лікарських препаратів у біологічних зразках;

• визначенняизотипов (IgG, IgM та інші) антитіл проти конкретного антигену;

• виявлення імунних комплексів;

• виявленняонкомаркеров;

• визначення білків сироватки крові (феритин,фибронектин та інших.);

• визначення загальногоIgE і специфічнихIgE антитіл;

• скринінгумоиоклональних антитіл;

• визначення цитокінів в біологічних рідинах.

 

 

РІА Застосовується рідко внаслідок своєї екологічної небезпечності.