Современные методы лабораторной диагностики сифилиса

Им­му­но­фер­мент­ный ана­лиз. Сре­ди мно­же­ст­ва се­ро­ло­ги­че­ских ме­то­дов од­ним из наи­бо­лее пер­спек­тив­ных для раз­ра­бот­ки ди­аг­но­сти­че­ских тест-сис­тем на си­фи­лис яв­ля­ет­ся им­му­но­фер­мент­ный ана­лиз (ИФА). В на­стоя­щее вре­мя наи­боль­шее рас­про­стра­не­ние по­лу­чил не­пря­мой ва­ри­ант ИФА, на за­клю­чи­тель­ном эта­пе ко­то­ро­го ис­поль­зу­ют­ся ан­ти­ви­до­вые АТ к им­му­ног­ло­бу­ли­нам че­ло­ве­ка, конъ­ю­ги­ро­ван­ные с пе­рок­си­да­зой хре­на или дру­ги­ми фер­мент­ны­ми мар­ке­ра­ми.

Ме­тод им­му­ноб­ло­тин­га. Од­ним из со­вре­мен­ных ме­то­дов ди­аг­но­сти­ки си­фи­ли­са яв­ля­ет­ся им­му­ноб­ло­тинг (Western blot) для оп­ре­де­ле­ния IgG ли­бо IgM. При про­ве­де­нии им­му­ноб­ло­тин­га T.pallidum под­вер­га­ют­ся элек­тро­фо­ре­зу в гра­ди­ен­те кон­цен­тра­ции до­де­цил­суль­фа­та на­трия, в ре­зуль­та­те че­го про­ис­хо­дит раз­де­ле­ние бел­ко­вых им­му­но­де­тер­ми­нант на нит­ро­цел­лю­ло­зе. За­тем про­из­во­дит­ся об­ра­бот­ка раз­де­лен­ных “то­чек” (blots) ис­сле­дуе­мой сы­во­рот­кой и ан­ти­те­ла­ми к IgG ли­бо IgM, ме­чен­ны­ми фер­мен­та­ми ли­бо ра­дио­ак­тив­ны­ми ве­ще­ст­ва­ми. IgG - им­му­ноб­ло­тинг по чув­ст­ви­тель­но­сти и спе­ци­фич­но­сти по­до­бен РИФ-абс. При­ме­не­ние ан­ти-IgM спе­ци­фи­че­ско­го конъ­ю­га­та (IgM Western blot) при про­ве­де­нии им­му­ноб­ло­тин­га мо­жет слу­жить ди­аг­но­сти­че­ским тес­том для вро­ж­ден­но­го си­фи­ли­са, бо­лее чув­ст­ви­тель­ным по срав­не­нию с FTA - ABS 19S IgM (чув­ст­ви­тель­ность и спе­ци­фич­ность 83 и 90% со­от­вет­ст­вен­но).

По­ли­ме­раз­ная цеп­ная ре­ак­ция (ПЦР) при­ме­ня­ет­ся для оп­ре­де­ле­ния спе­ци­фи­че­ских по­сле­до­ва­тель­но­стей ДНК. Ме­тод за­клю­ча­ет­ся в мно­го­крат­ном уве­ли­че­нии (ам­пли­фи­ка­ции) ко­ли­че­ст­ва ДНК ди­аг­но­сти­руе­мо­го мик­ро­ор­га­низ­ма. Раз­ра­бот­ка ва­ри­ан­тов ПЦР для ди­аг­но­сти­ки си­фи­ли­са обу­слов­ли­ва­ет­ся не­дос­та­точ­но­стью стан­дарт­ных тес­тов при ран­нем се­ро­не­га­тив­ном, вро­ж­дён­ном си­фи­ли­се и ней­ро­си­фи­ли­се. Об­на­ру­же­ние T.pallidum с по­мо­щью ПЦР зна­чи­тель­но об­лег­ча­ет­ся вы­ра­жен­ным ге­не­ти­че­ским кон­сер­ва­тиз­мом и прак­ти­че­ским от­сут­ст­ви­ем ре­ком­би­на­ций да­же ме­ж­ду под­ви­да­ми. Боль­шим дос­то­ин­ст­вом ПЦР яв­ля­ет­ся воз­мож­ность ав­то­ма­ти­за­ции ре­ак­ции пу­тём за­дан­но­го цик­ли­че­ско­го тем­пе­ра­тур­но­го ре­жи­ма. При­ме­не­ние ПЦР мо­жет иметь боль­шое зна­че­ние при ди­аг­но­сти­ке вро­ж­дён­но­го си­фи­ли­са (пас­сив­ный транс­пла­цен­тар­ный пе­ре­нос ан­ти­тел не влия­ет на ре­зуль­та­ты тес­та), ней­ро­си­фи­ли­са (чув­ст­ви­тель­ность су­ще­ст­вую­щих тес­тов око­ло 50%), пер­вич­но­го се­ро­не­га­тив­но­го (в на­стоя­щее вре­мя од­ним из кри­те­ри­ев яв­ля­ет­ся пря­мое мик­ро­ско­пи­че­ское об­на­ру­же­ние тре­по­нем), а так­же при ди­аг­но­сти­ке си­фи­ли­са у ВИЧ-ин­фи­ци­ро­ван­ных.

Исследование спинномозговой жидкости

Дан­ные ис­сле­до­ва­ния спин­но­моз­го­вой жид­ко­сти (ли­к­во­ра) ис­поль­зу­ют в сле­ду­ю­щих слу­ча­ях: для оп­ре­де­ле­ния по­ра­же­ния си­фи­ли­сом нер­в­ной си­с­те­мы; как кри­те­рий ка­че­ст­ва ле­че­ния у лиц с па­то­ло­ги­че­с­ки­ми из­ме­не­ни­я­ми в ли­к­во­ре до ле­че­ния; как один из кри­те­ри­ев из­ле­чен­но­сти боль­но­го.

В кли­ни­че­с­кой ла­бо­ра­то­рии ис­сле­ду­ют ци­тоз, со­дер­жа­ние бел­ка, гло­бу­ли­но­вые ре­ак­ции Пан­ди и Нон­не-Апель­та. В се­ро­ло­ги­че­с­кой ла­бо­ра­то­рии про­во­дят ре­ак­цию Вас­сер­ма­на с тре­мя раз­ве­де­ни­я­ми ли­к­во­ра, ре­ак­цию Лан­ге с кол­ло­ид­ным зо­ло­том, РИТ, РИФ₁₀и РИФ_ц(ре­ак­ция им­му­ноф­лю­о­рес­цен­ции с цель­ным ли­к­во­ром).

Ми­ни­маль­ные па­то­ло­ги­че­с­кие из­ме­не­ния в спин­но­моз­го­вой жид­ко­сти сле­ду­ю­щие: со­дер­жа­ние бел­ка, на­чи­ная с 0,4‰; ци­тоз - 8 кле­ток в 1 мм³; гло­бу­ли­но­вые ре­ак­ции (ре­ак­ция Нон­не-Апель­та ++, ре­ак­ция Пан­ди +++); ре­ак­ция Лан­ге - боль­ше двух дво­ек в циф­ро­вом зна­че­нии; по­ло­жи­тель­ная ре­ак­ция Вас­сер­ма­на. По­ка­за­те­ли вы­ше­ ука­зан­ных, да­же бу­ду­чи изо­ли­ро­ван­ны­ми, сви­де­тель­ст­ву­ют о вы­ра­жен­ных па­то­ло­ги­че­с­ких из­ме­не­ни­ях в спин­но­моз­го­вой жид­ко­сти. Па­то­ло­ги­че­с­кой счи­та­ет­ся так­же та­кая спин­но­моз­го­вая жид­кость, в ко­то­рой не­сколь­ко по­ка­за­те­лей из­ме­не­ны со­от­вет­ст­вен­но дан­ным ми­ни­маль­ной па­то­ло­гии, а ре­ак­ция Вас­сер­ма­на по­ло­жи­тель­ная.

Для обо­з­на­че­ния по­зи­тив­но­сти гло­бу­ли­но­вых ре­ак­ций и РВ при­ме­ня­ет­ся си­с­те­ма че­ты­рех плю­сов: ре­з­ко по­ло­жи­тель­ный ре­зуль­тат (4+), по­ло­жи­тель­ный (3+), сла­бо­по­ло­жи­тель­ный (2+), со­м­ни­тель­ный (1+).

Ис­поль­зо­ва­ние РИФ также це­ле­со­об­раз­но при ли­к­во­ро­ди­аг­но­сти­ке си­фи­ли­са. Осо­бен­но вы­со­ко­чув­ст­ви­телен и спе­ци­фи­ч­ен тест с цель­ным ли­к­во­ром (РИФ-ц). РИТ со спин­но­моз­го­вой жид­ко­стью по по­ста­нов­ке, ре­ги­ст­ра­ции и оцен­ке ре­зуль­та­тов ана­ло­ги­ч­на та­ко­вой при ис­сле­до­ва­нии сы­во­рот­ки кро­ви. При­ме­не­ние РИФ и РИТ рас­ши­ря­ет воз­мо­ж­но­сти оп­ре­де­ле­ния си­фи­ли­ти­че­с­ко­го по­ра­же­ния нер­в­ной си­с­те­мы.