Реактивы

1) 1% р-р CuSО₄, 2) р-р Люголя, 3) 0,9% р-р NaCl.

Материал исследования

Слюна, разведенная 1:10 (источник ‑амилазы).

Проведение реакции

Приготовление препарата слюны (выполняет дежурный для всей группы).

Собирают 1 мл слюны в мерную пробирку и доводят дистиллированной водой до метки 10 мл, хорошо перемешивают.

Чтобы исключить протекание ферментативной реакции без влияющих факторов, их необходимо вносить в пробирки в первую очередь.

	Опыт 1, капли	Опыт 2, капли	Контроль, капли
Дистиллир. вода 0,9% раствор NaCl 1% раствор CuSО4 Препарат слюны 1% раствор крахмала	–– 10 –– 10 10	–– –– 10 10 10	10 –– –– 10 10
	Перемешивают. Инкубируют при температуре 37°С в течение 10 мин

Проверка хода гидролиза крахмала:

По истечении рекомендуемого времени инкубации готовят 3 дополнительные пробирки с водой по 1 мл в каждой, добавляют 1‑2 капли реактива Люголя и прибавляют по 5 капель содержимого опытных пробирок. Сравнивают окраску раствора в дополнительных пробирках:

• если существенной разницы в окраске нет, то инкубацию опытных проб продлевают на 5‑15 минут, после этого вновь проверяют ход гидролиза крахмала,

• если имеются видимые отличия в окраске, то работа закончена.

После окончания работы сравнивают интенсивность окраски раствора в пробах, отмечают, как изменилась скорость реакции при воздействии веществ. Проба с добавлением воды является контрольной.

Оформление работы

Отмечают принцип метода и ход работы. Результаты работы оформляют в виде таблицы. В выводах сравнивают скорость реакции в пробах и отмечают причину различий.

Пробы	Влияющий фактор	Окраска	Относительная скорость реакции
Опыт 1 Опыт 2 Контроль

Тема 3.2. Классификация и номенклатура ферментов. Использование ферментов в медицине

Актуальность

Ферменты – белковые молекулы, выполняющие в живой клетке функции биокатализаторов. Знание принципов классификации ферментов необходимо для изучения обмена веществ, для понимания роли ферментов в осуществлении биохимических реакций.

Исследование ферментов дает возможности их синтеза и использования в лечебных или диагностических целях.

Цель

Знакомство с классификацией ферментов.

Знакомство с методами обнаружения ферментов в тканях и биологических жидкостях, освоение метода определения активности амилазы в сыворотке крови.

Вопросы для самоподготовки

1. Роль ферментов и коферментов в катализе.

Коферментные формы витаминов (ТДФ, ФМН и ФАД, НАД⁺и НАДФ⁺, ПФ).

Принципы современной классификации и номенклатуры ферментов: оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы (синтетазы).

Характеристика каждого класса ферментов по плану:

• название и номер класса;

• биохимическая роль;

• основные подклассы (1-3 подкласса);

• основные коферменты данного класса;

• правила систематического названия ферментов;

• напишите примеры биохимических реакций данного класса ферментов (1-3 реакции).

Практическое использование ферментов в медицине: энзимодиагностика и энзимотерапия. Примеры.

Применение ингибиторов ферментов в качестве лекарственных средств. Примеры.

Энзимопатии, первичные и вторичные формы. Примеры. Роль отсутствия коферментов в развитии энзимопатий.

Определение активности амилазы в сыворотке крови и моче. Принцип метода. Клинико-диагностическое значение и нормальные величины.