Темы для реферативных сообщений

1. Мелатонин, место синтеза, химическая природа, влияние на метаболизм в норме и патологии. Возможность использования мелатонина в клинической практике.

Нарушения функции соматотропного гормона. Молекулярные причины. Клинические проявления заболеваний, их диагностика. Основы лечения.

Несахарный диабет, его виды. Молекулярные механизмы. Метаболические нарушения. Клинические симптомы. Основы лечения.

Причины недостаточности функции щитовидной железы. Симптомы, клинические проявления у детей и взрослых. Основы лечения. Роль гипофункции щитовидной железы в репродуктивном здоровье женщины.

Лабораторная работа 1

Качественные реакции на инсулин

Принцип

Инсулин является простым белком и дает характерные качественные реакции на белок: биуретовую, ксантопротеиновую, Фоля и др. Эти реакции не специфичны.

Материал исследования

Раствор инсулина.

Реактивы

1) Реактив Фоля, содержащий 5% раствор (CH₃COO)₂Pb и 30% раствор NaOH, 2) 0,5% р-р нингидрина, 3) 30% р-р NaOH, 4) 10% р-р NaOH, 5) 5% р-р Pb(CH₃COO)₂, 6) 5% р-р нитропруссида натрия, 7) конц.HNO₃, 8) 5% р-рCuSO₄.

Проведение анализа

В пробирки наливают по 5 капель раствора инсулина и проделывают качественные реакции на белок.

Реакция на пептидную связь

Для обнаружения пептидной связи в инсулине используется универсальная биуретоваяреакция.

Принцип

Пептидная группа образует в щелочной среде с ионами Сu²⁺комплексное соединение фиолетового цвета с красным или синим оттенком в зависимости от числа пептидных связей. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству пептидных групп.

Проведение анализа

В пробирку с 5 каплями раствора инсулина вносят 3 капли 10% раствора NаОН и 1 каплю 5% раствора CuSО₄.

Реакция для обнаружения ‑аминогрупп

Для обнаружения ‑аминогрупп, содержащихся в аминокислотах, и концевых‑аминогрупп инсулина используетсянингидриновая реакция.

Принцип

При нагревании белка с нингидрином происходят окислительное отщепление ‑аминогрупп и восстановление нингидрина. Восстановленный нингидрин реагирует с аммиаком и другой молекулой окисленного нингидрина с образованием комплекса сине-фиолетового цвета.

Проведение анализа

5 капель раствора инсулина смешивают с 5 каплями 0,5% раствора нингидрина. Пробирки нагревают и кипятят до появления сине-фиолетового окрашивания.

Реакция на ароматические аминокислоты

Для обнаружения ароматических аминокислот (фенилаланин, тирозин, триптофан) используется ксантопротеиновая реакция.

Принцип

Ароматическое кольцо при взаимодействии с концентрированной азотной кислотой образует динитросоединение желтого цвета.

Проведение анализа

К 5 каплям 1% раствора инсулина добавляют 2 капли конц.HNO₃и осторожно нагревают. Наблюдают за появлением желтого окрашивания, при отсутствии желтого цвета еще добавляют 1-2 капли конц.HNO₃. При добавлении избытка 30% раствора NаОН окраска переходит в оранжевую.

Реакции на серосодержащие аминокислоты

Принцип

Сульфгидрильные группы в инсулине подвергаются щелочному гидролизу, в результате чего происходит отщепление серы в виде сульфида натрия Na₂S, который вступает в дальнейшие реакции:

• реакция Фоля– Na₂S с ацетатом свинцаPb(CH₃COO)₂дает черный или бурый осадок сульфида свинца;

• реакция с нитропруссидом– Na₂S дает с нитропруссидом натрия соединение, окрашенное в красно-коричневый цвет.

Проведение анализа

5 капель раствора инсулина и 5 капель 30% раствора NaOH кипятить 1‑2 минуты. Разделить содержимое на 2 части для реакций "а" и "б".

а) Реакция Фоля

К 5 каплям гидролизата добавляют 1 каплю раствора уксусно-кислого свинца и нагревают до кипения. Отмечают появление бурого или черного осадка.

б) Реакция с нитропруссидом

К 5 каплям гидролизата добавляют 2-3 капли раствора 5% натрия нитропруссида. Отмечают появление красно-коричневого окрашивания.

Оформление работы

Отмечают принцип методов, регистрируют результаты анализа и делают вывод о наличии инсулина в исследуемом материале.

Лабораторная работа 2

Качественная реакция на тироксин

Реактивы

1) 10% р-р NaOH, 2) 10% р-р Н₂SO₄, 3) 2% р-р KJ, 4) 10% р-р NaHCO₃, 5) 1% р-р крахмала, 6) лакмусовая бумага, 7) 0,5% спиртовый р-р фенолфталеина.

Материал исследования

Таблетки тиреоидина.

Проведение анализа

1. Гидролиз тиреоидина (выполняет лаборант):

В ступку помещают 10 таблеток тиреоидина и тщательно растирают. Растертую массу пересыпают в колбу для гидролиза, добавляют 20 мл 10% раствора NaHCO₃. Колбу с обратным холодильником помещают на асбестовую сетку и содержимое колбы кипятят точно 15 минут (с момента закипания) при умеренном нагревании.

2. Обнаружение йода в гидролизате тиреоидина:

Для обнаружения йода в гидролизате в пробирку наливают 24 капли гидролизата тиреоидина, прибавляют 3 капли 1% раствора крахмала, 1 каплю 0,5% спиртового раствора фенолфталеина, 4 капли 2% раствора KJ и 10-15 капель 10% раствора Н₂SO₄до прекращения выделения пузырьков углекислого газа и появления синего окрашивания.