Оформление работы

Работу записывают в виде таблицы. По результатам анализа делается вывод о способности данных методов выявлять глюкозу в жидкости.

Исследуемый материал	Реакция	Результат
Нормальная моча Моча с глюкозой

Лабораторная работа 2

Исследование влияния амилазы слюны на крахмал и целлюлозу

Крахмал является гомополисахаридом, состоящим из амилопектина и ‑амилозы. В‑амилозе остатки глюкозы связаны между собой‑(14)‑глико­зидными связями, в амилопектине –‑(14)‑глико­зид­ными связями и‑(16)‑глико­зидными связями. Целлюлоза является гомополисахаридом, в котором остатки глюкозы связаны между собой только‑(14)‑гликозид­ными связями.

Фермент ‑амилаза гидролизует только‑(14)‑гликозидные связи.

Принцип

В пробу вносят биологическую жидкость (источник ферментов) и предполагаемый субстрат (крахмал и целлюлоза). О протекании гидролиза субстрата можно судить по появлению характерной окраски при проведении реакции Троммера (см. "Лабораторная работа 1").

Положительная реакция Троммера свидетельствует о наличии в среде продуктов гидролиза – мальтозы или глюкозы. Отрицательная реакция свидетельствует об отсутствии продуктов гидролиза и неоптимальных условиях для работы фермента.

Материал исследования

1) 1% р-р крахмала, 2)1% водная суспензия целлюлозы.

Реактивы

1) Желудочный сок; 2) 5% р-р панкреатина; 3) слюна, разведение (1:5); 4) 1% р-р CuSO₄; 5) 10% р-р NaOH.

Проведение анализа

1. Готовят пробы соответственно таблице:

N пробы	Раствор крахмала, мл	Суспензия целлюлозы, мл	Слюна (1:5), мл	Желудочный сок, мл	Панкреатин, мл
1 2 3 4 5 6 7 8	1,0 1,0 1,0 1,0 –– –– –– ––	–– –– –– –– 1,0 1,0 1,0 1,0	1,0 –– 1,0 –– 1,0 –– 1,0 ––	–– 1,0 1,0 –– –– 1,0 1,0 ––	–– –– –– 2,0 –– –– –– 2,0

2. Для протекания реакции пробирки выдерживают при 37С в течение 30 минут.

3. После инкубации содержимое каждой пробирки анализируют на присутствие продуктов расщепления полисахарида с помощью реакции Троммера.

4. Для этого в каждую из 8 пробирок добавляют по 15 капель 10% раствора NaOH и по 5 капель 1% раствора CuSO₄. Ставят все пробирки в кипящую водяную баню и кипятят в течение 1 минуты. Появление красного осадка оксида меди (I) указывает на положительную реакцию Троммера в присутствии мальтозы.

Примечание: возможная окраска пробирок 4 и 8 в розово-фиолетовый цвет обусловлена биуретовой реакцией на белки препарата панкреатина. Желтый цвет в пробе 8 может быть вызван наличием глюкозы в ткани поджелудочной железы, из которой приготовлен панкреатин.

Оформление работы

Указывают принцип метода и ход работы. Результаты оформляют в виде таблицы. Делают вывод об особенностях переваривания крахмала и целлюлозы в пищеварительном тракте.

N пробы	Субстрат	Ферменты, присутствую­щие в пробе	Условия работы фермента (рН)	Результаты