Оформление работы
Записывают принцип методов и результаты анализа, отмечают клинико-диагностическое значение. Делают вывод о практическом значении метода и о возможных патологиях.
Лабораторная работа 2
Определение содержания общего белка в сыворотке крови
Биуретовый метод
Принцип
Пептидная связь в щелочной среде образует с медью комплексное соединение (биуретовая реакция). Интенсивность развивающегося сине-фиолетового окрашивания пропорциональна содержанию белка.
Материал исследования
Сыворотка крови.
Реактивы
1) Биуретовый реактив: смесь р-ра CuSO4и р-ра NaOH; 2) 0,9% р-р NaCl.
Стандартный раствор альбумина, 70 г/л.
Проведение анализа
|
|
Опыт, мл |
Стандарт, мл |
|
Сыворотка крови |
0,04 |
–– |
|
Стандартный р-р альбумина |
–– |
0,04 |
|
Биуретовый реактив |
3,0 |
3,0 |
|
|
Инкубируют 10 минут и измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против воды при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр) | |
Расчет
Концентрация общего белка сыворотки,
г/л =
,
где
Еопи Ест– оптическая плотность опытной и стандартной пробы, Сст– концентрация белка в стандартной пробе.
Нормальные величины
|
Сыворотка крови |
дети от 1 года до 3 лет |
54-85 г/л |
|
|
старшие дети и взрослые |
65-85 г/л |
Рефрактометрический метод
Принцип
При переходе из одной прозрачной среды (стекло) в другую (сыворотка крови) под наклоном к поверхности раздела двух фаз луч света преломляется. При этом отношение синуса угла падения к синусу угла преломления называется коэффициентом преломления (рефракции). В сыворотке крови величина рефракции зависит от количества и состава белков.
Материал исследования
Сыворотка крови.
Оборудование
Рефрактометр.
Реактивы
1. Проверяют нулевую точку прибора путем определения показателя преломления дистиллированной воды.
Для этого на чистую поверхность измерительной призмы капают 2-3 капли воды и опускают осветительную призму. Наводят окуляр на резкость. Поворотом рефрактометра к свету добиваются наилучшей освещенности шкалы и штриха. Вращением маховичка "И" границу светотени вводят в поле зрения окуляра. Вращают маховичок компенсатора "К" до исчезновения окраски границы светотеней. Наблюдая в окуляр, маховичком "И" наводят границу светотени точно на линию штриха.
Снимают отсчет по шкале. Показатель преломления дистиллированной воды равен 1,333.
2. Измерение показателя преломления сыворотки крови проводят аналогичным образом.
3. После проведения измерений поверхности призм очищают мягкой салфеткой.
Расчет
Зная показатель преломления, расчет проводят по таблице.
|
Показатель преломления |
Концентрация белка в сыворотке крови, г/л |
Показатель преломления |
Концентрация белка в сыворотке крови, г/л |
|
1,34500 1,34557 1,34575 1,34612 1,34650 1,34687 1,34724 1,34761 |
52,5 54,7 56,8 59,0 61,2 63,4 65,5 67,7 |
1,34798 1,34836 1,34870 1,34910 1,34947 1,34984 1,35021 |
69,8 72,0 74,2 76,3 78,5 80,6 82,8 |