Практическое значение

Разделение смеси аминокислот методом распределительной хроматографии используют для определения аминокислотного состава белков, для качественного и количественного определения аминокислот в биологических жидкостях и тканях. В научных лабораториях применяются автоматические анализаторы аминокислот с высокой чувствительностью и скоростью проведения анализа.

Определение свободных аминокислот в биологических жидкостях необходимо для диагностики нарушений их обмена. Изменения концентрации аминокислот в сыворотке крови и моче наблюдаются при недостаточной функции печени, усиленном распаде белков, ферментативных нарушениях обмена аминокислот, а также при нарушении выделительной функции почек.

Недостаток аминокислот сказывается в первую очередь на активно работающих органах, например, сердечной мышце.

При врожденных дефектах метаболизма аминокислот увеличивается концентрация в крови и усиливается экскреция с мочой одной или нескольких аминокислот.

Оформление работы

Записывают принцип метода, ход работы, расчеты коэффициента распределения известных и неизвестных аминокислот, подклеивают в тетрадь или зарисовывают полученную хроматограмму с указанием аминокислот.

Лабораторная работа 2

Обнаружение метаболитов фенилаланина в моче

Принцип

Кетоны (фенилпируват, фенилацетат и др.) при взаимодействии с FeCl₃образует комплексное соединение зеленого цвета (реакция Феллинга).

Реактивы

1) 10% р-р FeCl₃, 2) 2,5 М р-р H₂SO₄.

Материал исследования

Моча.

Проведение анализа

В пробирку вносят 1 мл мочи, добавляют 2 капли 2,5 М раствора H₂SO₄, после перемешивания добавляют 2 капли раствораFeCl₃. В случае присутствия в моче метаболитов фенилаланина в пробирке через 1-3 минуты появляется зеленое окрашивание.

При фенилкетонурии и тирозинемии появляется зеленый цвет, при гомогентизинатурии – сине-зеленая окраска, при болезни кленового сиропа – серо-зеленое окрашивание.

Нормальные величины

Моча	отсутствие

Клинико-диагностическое значение

Тест на наличие кетонов в моче используется при нарушениях обмена аминокислот (фенилаланина, тирозина, лейцина). Тест не пригоден для диагностики и не является скрининговым, однако может применяться для контроля над соблюдением диеты при установленном диагнозе.

При фенилкетонурии (фенилпировиноградная олигофрения) положительную реакцию Феллинга моча дает обычно только после года жизни. До года положительный тест выявляется эпизодически (на максимуме выведения фенилкетонов), поэтому при подозрении на фенилкетонурию его следует повторять неоднократно.

Производные фенилаланина появляются в моче также при поражениях печени (вирусный гепатит, отравление ядами).

Оформление работы

Записывают принцип метода, ход работы, используемый реактив и результаты проведения анализа. Отмечают клинико-диагностическое значение и делают вывод о наличии возможных патологий.

Тестовые задания

Выберите один правильный ответ.

1. Биологическая ценность белков обусловлена

1) порядком чередования аминокислот в молекуле белка

2) аминокислотным составом

3) молекулярной массой белков

4) зарядом белковой молекулы

2. Для нейтрализации токсичных веществ, образующихся в толстом кишечнике, в печени присутствует фермент

1) гексокиназа

2) аминотрансфераза

3) глюкуронилтрансфераза

4) сахараза

3. Энтеропептидаза является активатором фермента

1) пепсиноген

2) трипсиноген

3) химотрипсиноген

4) проэластаза

4. Высокоактивный фермент глутаматдегидрогеназа содержит

1) никотинамидадениндинуклеотид (НАД)

2) флавинадениндинуклеотид (ФАД)

3) флавинмононуклеотид (ФМН)

4) пиридоксальфосфат (ПАЛФ)

5. Серотонин в реакции декарбоксилирования образуется из

1) гистидина

2) триптофана

3) тирозина

4) 5-гидрокситриптофана

6. Образование -аминомасляной кислоты катализирует

1) гистидиндекарбоксилаза

2) тирозинмонооксигеназа

3) глутаматдекарбоксилаза

4) орнитиндекарбоксилаза

7. В состав аминотрансферазы входит кофермент

1) никотинамидадениндинуклеотид

2) флавинадениндинуклеотид

3) тиаминдифосфат

4) пиридоксальфосфат

8. Синтез соляной кислоты в желудке стимулирует

1) тирамин

2) гистамин

3) дофамин

4) триптамин

9. При гиповитаминозе С нарушен обмен аминокислоты

1) тирозина

2) лейцина

3) метионина

4) цистеина

10. Связывание аммиака происходит при

1) синтезе глутамата из 2-оксоглутарата

2) синтезе креатина

3) трансаминировании аланина

4) синтезе серотонина