Темы для реферативных сообщений

1. Применение ферментов и их ингибиторов в качестве лекарственных средств.

2. Использование ферментов в промышленности, в биохимических и иммунологических исследованиях.

Лабораторная работа 1

Количественное определение активности амилазы в сыворотке крови и моче

Принцип

‑Амилаза (диастаза, 1,4‑‑D‑глюкангидролаза, КФ 3.2.1.1.) катализирует гидролиз‑1,4‑гликозидных связей крахмала и гликогена до мальтозы и декстринов.

Крахмал + Н₂ОМальтоза + Декстрины

Количество оставшегося крахмала, пропорциональное каталитической активности фермента, определяют по цветной реакции с йодом.

Реактивы

1) Субстрат, 0,04% р-р крахмала в дистиллированной воде, 2) 0,01 М рабочий раствор йода.

Материал исследования

Сыворотка крови. Моча.

Проведение анализа

	Опыт 1, мл	Опыт 2, мл	Контроль, мл
Раствор крахмала	1,0	1,0	1,0
	Инкубируют при 37°С в течение 5 минут
Сыворотка крови	0,02	––	––
Моча	––	0,02	––
	Инкубируют при 37°С точно 5 минут
0,01 М рабочий р-р йода Холодная дистил. вода	1,0 8,0	1,0 8,0	1,0 8,0
	Перемешивают. Измеряют оптическую плотность опытных и контрольного растворов против воды при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Активность амилазы, г/л·ч = , где

Е_контри Е_опыт– соответственно оптическая плотность контрольной и опытных проб, 240 – коэффициент пересчета.

Нормальные величины

Сыворотка крови Моча

16-30 г/л·ч 28-160 г/л·ч

Клинико-диагностическое значение

У здорового человека в крови содержится амилаза 2 изоферментных типов: панкреатическая – P‑тип (около 30%) и слюнная – S‑тип (около 70%), которые попадают в кровь в результате естественного старения и отмирания клеток слюнных желез и поджелудочной железы. Фермент имеет относительно низкую молекулярную массу (около 48000 Д), фильтруется в почечных клубочках и присутствует в моче. Соотношение изоферментов в моче иное, чем в крови: Р‑тип – 70%, S‑тип – до 30%.

Сыворотка крови и моча

Повышение активности фермента в сыворотке крови и в моче происходит главным образом при заболеваниях поджелудочной железы. При остром панкреатите активность фермента в крови достигает максимума через 12‑24 часа от начала заболевания (повышение в 10‑30 раз) и при правильной терапии нормализуется на 2‑6-е сутки. При хронических панкреатитах повышение активности фермента умеренное. Возрастание активности фермента выявляется также при поражении слюнных желез, холецистите, заболеваниях желчных путей, беременности, почечной недостаточности, кишечной непроходимости, диабетическом кетоацидозе, некоторых опухолях легких и яичников.

Снижение активности в клинической практике выявляется редко, обычно диагностического значения не имеет. Иногда отмечается у больных с заболеваниями печени (цирроз), злокачественными опухолями, гипотиреозом, кахексией, при токсикозе беременных.