Клинико-диагностическое значение

Метод высаливания ранее использовали в лабораторной практике для разделения альбуминов и глобулинов, определения их соотношения в сыворотке крови. В норме отношение альбумины/глобулины в сыворотке крови человека колеблется в пределах 1,2-1,8 и при патологии может изменяться в сторону повышения или снижения. Например, при воспалительных заболеваниях увеличивается содержание глобулинов.

Оформление работы

Отмечают принцип метода, ход работы, регистрируют результаты анализа и делают вывод о возможности разделения альбуминов и глобулинов данным методом.

Лабораторная работа 2

Исследование денатурации белков

Денатурация белков – это изменение структурной организации белковой молекулы (четвертичной, третичной и вторичной структуры), приводящее к изменению физико-химических и биологических свойств белка. Денатурирующие факторы делятся на химические (кислоты, тяжелые металлы), физические (ультразвук, высокая и низкая температуры).

Реактивы

1) 1% и 10% р-р СН₃СООН, 2) ацетон, 3) 10% р-р ТХУ, 4) конц.HNO₃, 5) 1% р-р СuSO₄, 6) конц.H₂SO₄, 7) 5% р-р Pb(CH₃COO)₂, 8) танин, 9) 20% р-р сульфосалициловой кислоты, 10) 10% р-р NaOH, 11) насыщенный р-р NaCl.

Материал исследования

Яичный белок, 1% водный раствор.

Принцип

Денатурация снижает заряд и гидратную оболочку белков и, соответственно, гидрофильность и устойчивость их в растворе.

Исследование химической денатурации

Проведение анализа

В ряд пронумерованных пробирок вносят по 5 капель 1% раствора яичного белка и добавляют реактивы, пользуясь указаниями таблицы. Знаками "+" и "–" отмечают результаты наблюдения. Интенсивность денатурации указывают числом знаков "+".

Необратимость или обратимость осаждения белка устанавливают добавлением к осадку 20-30 капель дистиллированной воды.

N проб	Используемые реактивы	Число капель	Механизм и особенности реакции	Резуль­тат
Денатурация солями тяжелых металлов
1 2	Меди сульфат Свинца ацетат	2 2	Ионы металлов связываются с заряженными группами аминокислот, в результате чего изменяется пространственная структура белка
Денатурация концентрированными минеральными кислотами
3 4	Азотная Серная	2 2	Концентрированные кислоты вызывают дегидратацию белков, нейтрализуют заряд белка, связываясь с катионными группами
5 6	Азотная Серная	10 10	Исчезновение осадка белка при добавлении избытка серной кислоты обусловлено перезарядкой ионных групп
Денатурация органическими кислотами
7	Трихлор­уксусная	2	Кислоты нейтрализуют заряд белка, разрушают систему водородных связей и образуют комплексы с белком
8	Сульфо­салици­ловая	2
Денатурация дубильными веществами
9	Танин	2	Образуются нерастворимые солеобразные соединения с аминогруппами основных аминокислот
Денатурация органическими растворителями
10	Ацетон	5	Нарушаются гидрофобные взаимодействия внутри белковой молекулы