Добавил:
Upload Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:
Лабораторный практикум по биологической химии.doc
Скачиваний:
161
Добавлен:
07.03.2016
Размер:
6.24 Mб
Скачать

Темы для реферативных сообщений

  1. Белая и бурая жировая ткань. Распределение в организме и метаболические особенности. Роль в организме.

  2. Первичные и вторичные ацетонемические состояния у детей.

  3. Современные представления о роли L-карнитина в организме. Участие карнитина в пре- и постнатальном развитии ребенка. Предполагаемая роль карнитина в патогенезе синдрома "смерти в колыбели".

Лабораторная работа 1

Определение кислотного числа пищевого жира

Принцип

Кислотное число обозначает количество КОН (мг), необходимое для нейтрализации свободных жирных кислот, содержащихся в 1 г жира.

Материал исследования

Свежее и старое растительное масло.

Реактивы

1) 0,1 М р-р КОН, 2) 1,0% р-р фенолфталеина, 3) бутанол.

Проведение анализа

Опыт 1,

 мл

Опыт 2,

мл

Свежее растительное масло

Старое растительное масло

Бутанол

1,0% раствор фенолфталеина

0,5

––

0,5

1-2 капли

––

0,5

0,5

1-2 капли

0,1 М раствор КОН

Титруют до светло-розового окрашивания, не исчезающего в течение минуты

Расчет

Кислотное число = , где

а – количество раствора щелочи (мл), израсходованное на титрование; 0,00561 – титр 0,1 М раствора КОН; б – объем жира (мл); 0,9 – плотность жира (г/мл); 1000 – коэффициент перевода мг в г.

Нормальные величины

Свежее растительное масло 1-3 ед

Практическое значение

Кислотное число жира отражает количество жирных кислот в пищевом продукте и используется для определения качества пищевого жира.

Изменение количества и состава пищевого жира при хранении носит название прогоркания жиров. Прогоркание жира обусловлено появлением в его составе летучих альдегидов, кетонов, жирных кислот невысокой молекулярной массы и нелетучих веществ перекисного характера.

Причиной прогоркания служат два вида факторов: биологическиеихимические. К группе биологических факторов относят микроорганизмы, осуществляющие превращение и гидролиз жирных кислот. Химическое прогорание (перекисное окисление липидов) связано с ультрафиолетовым облучением, тепловыми процессами, с окислением кислородом воздуха двойных связей жирных кислот, находящихся в составе триацилглицеролов и фосфолипидов.

Оформление работы

Записывают принцип метода, ход работы. Отмечают результаты для свежего и прогорклого растительного масла. Делают вывод об особенностях состава жирных кислот.

Лабораторная работа 2 Определение концентрации триацилглицеролов в сыворотке крови Принцип

Метод основан на использовании сопряженных ферментативных реакций, осуществляемых: 1) липазой, катализирующей гидролиз триацилглицеролов до спирта глицерола и жирных кислот; 2) глицеролкиназой, катализирующей фосфорилирование глицерола; 3) глицеролфосфат­оксидазой, окисляющей глицерол-3-фосфат в присутствии О2до диоксиацетонфосфата с образованием Н2О2; 4) пероксидазой, катализирующей в присутствии хлорфенола окисление перекисью водорода 4-аминоантипирина с образованием хинонимина, окрашенного продукта розового-малинового цвета.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Реактивы

Рабочий реактив: раствор липазы, глицеролкиназы, глицеролфосфатоксидазы, пероксидазы, хлорфенола, 4‑аминоантипирина в буферном растворе.

Стандартный раствор триацилглицерола (триолеат), 2,29 ммоль/л.

Проведение анализа

Опыт,

мл

Стандарт,

мл

Сыворотка крови

0,03

––

Стандартный р-р триацилглицерола

––

0,03

Рабочий реактив

3,0

3,0

Инкубируют 20 минут при 20-25°С, измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против воды при 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Концентрация триацилглицеролов, ммоль/л = , где

Еопи Ест – оптическая плотность опытной и стандартной проб, Сст– концентрация стандартного раствора

Нормальные показатели

Сыворотка крови

дети

0,15-1,56 ммоль/л

взрослые

0,45-1,71 ммоль/л

Клинико-диагностическое значение

Определение концентрации триацилглицеролов наиболее информативно для типирования первичного нарушения их обмена – гиперлипопротеинемий.

Повышение уровня триацилглицеролов наблюдается при ожирении, сахарном диабете, гипертонической болезни, ишемической болезни сердца, панкреатитах, хронической почечной недостаточности и нефротическом синдроме, гипотиреозе, атеросклерозе, алкоголизме.

Снижение концентрации триацилглицеролов отмечается при гипертиреозе, хронических обструктивных заболеваниях легких, терминальных стадиях поражения печени, синдроме мальабсорбции.