Оформление работы

Результаты работы заносят в таблицу. Делают вывод о составе нуклеопротеинов:

Объект иссл-я	Сложные белки	Выявляемый компонент	Окрашива­ние	Вывод о присутствии
Дрожжи	Нуклеопротеины	Белок
		Пуриновые основания
		Пентозы
		Фосфорная кислота

Тема 7.2. Биосинтез белка и его регуляция

Актуальность

Белки, как и другие компоненты клетки, находятся в состоянии динамического равновесия, то есть непрерывно обновляются. Знание механизма биосинтеза белка и принципов его регуляции необходимо для понимания молекулярных основ и рационального использования антибиотических и химиотерапевтических средств.

Цель

Изучить основные этапы биосинтеза белка и механизмы его регуляции.

Познакомиться с методами определения концентрации белка в сыворотке крови и моче.

Вопросы для самоподготовки

1. Строение протеиногенных аминокислот, нуклеиновых кислот ДНК и РНК. Как построены рибосомы, какова их роль в клетке?

2. Генетический код, его свойства.

Адапторная роль транспортной РНК. Синтез аминоацил-тРНК, специфичность аминоацил-тРНК-синтетазы.

Характеристика биосинтеза белка по плану:

• суммарное уравнение,

• связь с фазами клеточного цикла,

• локализация процесса,

• компоненты белок-синтезирующей системы

• основные этапы, последовательность реакций и ферменты,

• конечные продукты,

• источники энергии для синтеза.

Посттрансляционная модификация белковых молекул. Примеры белков, созревающих при участии этих процессов. Что такое фолдинг, в чем состоит роль шаперонов?

Лекарственные препараты как ингибиторы биосинтеза белка. Механизм действия на примере тетрациклинов, левомицетина, эритромицина, стрептомицина.

Количественное определение белка в сыворотке крови биуретовым и рефрактометрическим методами. Принцип методов, клинико-диагностическое значение и нормальные показатели.

Определение содержания белка в моче методом Роберстса-Стольникова. Проба с сульфосалициловой кислотой. Принцип методов. Клинико-диагностическое значение. Нормальные показатели.

Темы для реферативных сообщений

1. Шапероны. Их виды, строение, участие в стабилизации и созревании белковой молекулы. Фолдинг белков.

2. Прионы. Их происхождение и свойства. Прионные болезни.

3. Лекарственные препараты как ингибиторы матричного биосинтеза РНК, ДНК и белка. Механизм действия лекарств.

Лабораторная работа 1

Определение концентрации белка в сыворотке крови

Биуретовый метод

Принцип

Пептидная связь в щелочной среде образует с медью комплексное соединение (биуретовая реакция). Интенсивность развивающегося сине-фиолетового окрашивания пропорциональна содержанию белка.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Реактивы

1) Биуретовый реактив: смесь CuSO₄ и NaOH; 2) 0,9% р-р NaCl.

Стандартный р-р альбумина, 70 г/л.

Проведение анализа

	Опыт, мл	Стандарт, мл
Сыворотка крови	0,04	––
Стандартный раствор альбумина	––	0,04
Биуретовый реактив	3,0	3,0
	Выдерживают 15 минут. Измеряют оптическую плотность проб против воды на ФЭК при длине волны 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Концентрация белка, г/л = , где

Е_опи Е_ст– оптическая плотность опытной и стандартной проб, С_ст– концентрация белка в стандартной пробе.

Нормальные величины

Сыворотка крови	дети от 1 года до 3 лет	54-85 г/л
	старшие дети и взрослые	65-85 г/л

Клинико-диагностическое значение

См. ниже.

Рефрактометрический метод

Принцип

При переходе из одной прозрачной среды (стекло) в другую (сыворотка крови) под наклоном к поверхности раздела двух фаз луч света преломляется. При этом отношение синуса угла падения к синусу угла преломления называется коэффициентом преломления (рефракции). В сыворотке крови величина рефракции зависит от количества и состава белков.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Оборудование

Рефрактометр.

Реактивы

1. Проверяют нулевую точку прибора путем определения показателя преломления дистиллированной воды.

Для этого на чистую поверхность измерительной призмы наносят 2-3 капли воды и опускают осветительную призму. Наводят окуляр на резкость. Поворотом рефрактометра к свету добиваются наилучшей освещенности шкалы и штриха. Вращением маховичка "И" границу светотени вводят в поле зрения окуляра. Вращают маховичок компенсатора "К" до исчезновения окраски границы светотеней. Наблюдая в окуляр, маховичком "И" наводят границу светотени точно на линию штриха.

Снимают отсчет по шкале. Показатель преломления дистиллированной воды должен быть равен 1,333.

2. Измерение показателя преломления сыворотки крови проводят аналогичным образом.

3. После проведения измерений поверхности призм очищают мягкой салфеткой.

Расчет

Зная показатель преломления, расчет проводят по таблице.

Показатель преломления	Концентрация белка в сыворотке крови, г/л	Показатель преломления	Концентрация белка в сыворотке крови, г/л
1,34500 1,34557 1,34575 1,34612 1,34650 1,34687 1,34724 1,34761	52,5 54,7 56,8 59,0 61,2 63,4 65,5 67,7	1,34798 1,34836 1,34870 1,34910 1,34947 1,34984 1,35021	69,8 72,0 74,2 76,3 78,5 80,6 82,8