Темы для реферативных сообщений

1. Возрастная динамика белковых фракций. Эмбриоспецифические белки и их диагностическое значение.

Остаточный азот: его основные компоненты. Динамика уровня фракций остаточного азота в постнатальный период.

Лабораторная работа 1

Количественный метод определения содержания остаточного азота крови по методу Аселя

Остаточный азот является суммарным показателем безбелкового азота крови. Он складывается из мочевины (около 50%), аминокислот (около 25%), эрготионеина (около 8%), креатина и креатинина (до 7,5%), пептидов, нуклеотидов и азотистых оснований (около 5%), мочевой кислоты (до 4%), аммиака и индикана (0,5%). Так как показатель включает различные низкомолекулярные азотсодержащие вещества, более информативным является определение отдельных фракций остаточного азота.

Принцип

Сжигание небелкового фильтрата с концентрированной серной кислотой дает переход азота органических веществ в сульфат аммония, который с реактивом Несслера образует продукты желто-оранжевого цвета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации азота.

Материал исследования

Сыворотка крови.

Реактивы

1) Реактив Несслера (щелочной раствор йодистых солей ртути и калия), 2) 5% р-р NaOH, 3) лакмусовая бумага.

Стандартный раствор (NH₄)₂SO₄, 26 ммоль/л.

Оборудование

Колбы Кьельдаля, песчаная баня, фотоэлектроколориметр.

Проведение анализа

1. Подготовительный этап (выполняет лаборант):

Осаждение белков: в центрифужную пробирку, содержащую 1,8 мл дистиллированной воды, вносят 0,2 мл сыворотки крови, приливают 1,0 мл 10% раствора ТХУ, центрифугируют или фильтруют через смоченный бумажный фильтр.

Для минерализации 1,0 мл надосадка переносят в термостойкую пробирку, приливают 3 капли концентрированной H₂SO₄и 3 капли Н₂О₂. Осторожно упаривают и нагревают до получения бесцветного минерализата.

2. Цветная реакция

	Опыт, мл	Стандарт, мл
Минерализат	1,0	––
Стандартный раствор (NH4)2SO4	––	1,0
Раствор NaOH	Проверяя величину рН по лакмусовой бумажке, добавляют по каплям до тех пор, пока рН не станет нейтральной – в нейтральной среде лакмус синеет. N.B. Излишек щелочи вызывает помутнение раствора
Дистил. вода Реактив Несслера	8,0 2,0	8,0 2,0
	Измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против воды при 540 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Концентрация остаточного азота, ммоль/л = , где

Е_оп и Е_ст– оптическая плотность опытной и стандартной проб, С_ст– концентрация стандартного раствора

Клинико‑диагностическое значение

Остаточный азот является показателем состояния белкового обмена.

Увеличение фракций остаточного азота (гиперазотемия) по своему характеру может быть абсолютной, связанной с действительным накоплением этих компонентов в крови, и относительной, связанной с дегидратацией. В свою очередь, абсолютная гиперазотемия может быть ретенционная (почечного и внепочечного происхождения) и продукционная:

• ретенционная азотемия возникает в результате задержки выведения азотсодержащих веществ и различается на азотемии почечногопроисхождения (заболевания клубочков – нефриты, туберкулез почек, нефросклероз и др.) ивнепочечногопроисхождения. Внепочечные гиперазотемии подразделяются на надпочечные (результат нарушения гемодинамики и падения фильтрационного давления при сердечно-сосудистой недостаточности, снижении артериального давления) и подпочечные (при гипертрофии или аденоме простаты, почечно-каменной болезни);

• продукционная азотемия выявляется при всех состояниях, связанных с увеличением распада белков, от ретенционной ее отличает повышение содержания аминокислот в крови, а также одновременное накопление азотистых компонентов в крови и моче.

Уменьшение концентрации остаточного азота возникает при снижении содержания мочевины, аминокислот или других фракций.