Темы для реферативных сообщений

1. Усиление токсичных свойств соединений в результате биотрансформации. Химический канцерогенез.

2. Афлатоксины. Нитраты, нитриты и нитрозамины. Анилиновые красители. Их характеристика, токсичность и возможность обезвреживания в организме.

3. Метаболизм этанола. Механизмы токсического действия этанола. Современные представления о ферментативных путях метаболизма этанола: алкогольокисляющие ферментные системы.

Лабораторная работа 1

Исследование обезвреживающей системы печени

Исследование биотрансформации веществ с помощью амидопириновой пробы

Биотрансформация амидопирина (2,3-диметил-1-фенил-4-диметиламино­пиразолон-5, пирамидон) осуществляется микросомальной и конъюгационной системами печени. Первый этап процесса, N‑деметилиро­вание, осуществляется ферментами печени с образованием 4‑амино­антипирина. На втором этапе 4‑аминоантипирин подвергается ацетилированию с участием ацетил‑SКоА с образованием N‑ацетил-4-аминоантипирина.

Принцип

Исследование связано с определением концентрации 4‑аминоанти­пирина в моче. При взаимодействии с фенолом в щелочной среде и присутствии гексацианоферрата калия (III) (K₃[Fe(CN)₆], красная кровяная соль) 4‑аминоанти­пирин образует соединение типа индофенола, имеющего розовую окраску.

Материал исследования

Моча.

Реактивы

1) Аммиачный буфер, рН 10,5-10,6 (20 г хлорида аммония растворяют в 100 мл 25% раствора аммиака); 2) 0,02% раствор фенола перекристаллизованного; 3) 12,5% раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ); 4) 36% раствор соляной кислоты; 5) 1% раствор гексацианоферрата (III) калия K₃[Fe(CN)]₆.

Стандартный раствор 4‑аминоантипирина 1 г/л для построения калибровочного графика.

Проведение анализа

Обследуемый принимает утром натощак амидопирин из расчета 6 мг/кг веса (A_общ). Собирается 4 порции мочи в интервале соответственно от 1 до 6 часов, 6-12, 12-24 и 45-48 часов. Объем мочи измеряется. Не позже чем через 24 часа, моча центрифугируется или фильтруется.

Далее исследуется концентрация 4‑аминоантипирина (опыт 1) и N‑ацетил-4-аминоантипирина (опыт 2):

	Опыт 1, мл	Опыт 2, мл
Моча Аммиачный буфер Соляная кислота	1,5 0,3 0,3	1,5 –– 0,3
	Выдержать 15 минут при комнатной температуре	Закрыть пробкой. Выдержать 15 минут при 100С
	Пробирки охлаждают и центрифугируют при 1500 об/мин
Аммиачный буфер	––	0,6
		Вновь центрифугируют при 1500 об/мин
Надосадок Дистилл. вода ТХУ Раствор фенола Р-р K3[Fe(CN)6]	0,6 –– 0,5 2,0 0,1	0,8 0,2 –– 2,0 0,1
	Инкубируют 10 минут при 20-25°С. Не позднее чем через 60 минут измеряют оптическую плотность проб против воды при 510 нм (зеленый светофильтр)

Расчет

Концентрацию продуктов биотрансформации амидопирина в моче (мг/л) определяют по калибровочному графику, построенному с использованием калибровочных растворов антипирина в диапазоне от 3 до 20 мг/л.

Количество 4-аминоантипирина (A₁, мг в порции мочи) находят, умножая его концентрацию (опыт 1) на соответствующий объем мочи (л).

Общее количество 4-аминоантипирина и N‑ацетил-4-аминоантипирина (A₁₊₂, мг в порции мочи) находят, умножая их концентрацию (опыт 2) на соответствующий объем мочи (л).

Количество N-ацетил-4-аминоантипирина (A₂), выделенного с мочой за сутки, находят по разности содержания в опыте 1 и опыте 2.

Монооксигеназную активность печени оценивают по формуле:

Активность монооксигеназ (%) = , где

A₁ – количество 4-аминоантипирина в порции мочи,A_общ– количество введенного амидопирина.

Ацетилирующую активность ферментных систем печени находят по формуле:

Активность трансфераз (%) = , где

A₂ – количествоN-ацетил-4-аминоантипирина в порции мочи,A₁– количество 4-аминоантипирина в порции мочи.

Общую обезвреживающую способность ферментных систем печени оценивают по формуле:

Общая активность (%) =