Нормальные величины
|
Сыворотка крови |
0,4-0,5 мл р-ра CaCl2 |
Тимоловая проба
Принцип
Сывороточные ‑,‑глобулины и липопротеины осаждаются при рН 7,55 тимоловым реактивом вследствие образования глобулин-тимол-липидного комплекса.
Реактивы
Тимоловый буфер, рН 7,55‑7,60.
Материал исследования
Сыворотка крови.
Проведение анализа
|
|
Опыт, мл |
|
Сыворотка крови Тимоловый буфер |
0,05 3,0 |
|
|
Перемешивают и оставляют стоять 15 минут при комнатной температуре. Снова перемешивают и сравнивают с калибровочными пробами. Результат выражают в единицах помутнения S‑H (по авторам: Shank‑Haagland) |
Калибровочная шкала
В качестве калибровочных проб используются растворы с различной интенсивностью мутности. Перед использованием пробы необходимо тщательно перемешать.
|
N пробы |
Единицы помутнения, S‑H |
|
1 2 3 4 |
5 10 15 20 |
Нормальные величины
|
Сыворотка крови |
0‑4 ед.S‑H |
Клинико-диагностическое значение
Проба применяется для дифференциальной диагностики заболеваний печени. При поражении паренхимы печени (инфекционный и токсический гепатит) уже в преджелтушной стадии или при безжелтушной форме в 90‑100% случаев тимоловая проба выше нормальных величин. У здоровых индивидов, при остальных заболеваниях печени или нарушении функции других органов тимоловая проба соответствует норме.
Как и все коагуляционные тесты, тимоловая проба является неспецифической реакцией. Вместе с тем она более приемлема для функционального исследования печени, чем другие коллоидные пробы.
Оформление работы
Указывают принцип метода, ход работы, нормальные величины и результаты исследования, отмечают клинико-диагностическое значение показателя и делают выводы о возможной патологии.
Лабораторная работа 4 (теоретически) Электрофорез белков на бумаге и ацетатцеллюлозных пленках Принцип
Белковые молекулы, отрицательно заряженные при рН 6,8, перемещаются в электрическом поле постоянного тока: по направлению к аноду. Наиболее быстро перемещаются альбумины, затем по порядку 1-,2‑,- и‑глобулины.
На ход электрофореза влияет подвижность разделяемых веществ, находящаяся в зависимости от следующих факторов:
заряд (обычно зависит от pH), размеры и форма молекул веществ;
электрическое поле – скорость движения ионов белка прямо пропорциональна силе тока и напряжению и обратно пропорциональна сопротивлению (зависит от типа и размеров носителя и ионной силы буфера);
буферный раствор – состав, концентрация, pH и ионная сила (зависит от концентрации ионов и их заряда);
носитель – учитывается его гидрофильность, адсорбция веществ на молекулах носителя.
Материал исследования
Сыворотка крови.
Оборудование
Прибор для электрофореза, денситометр.
Проведение анализа (основные положения)
Образцы сыворотки равномерно наносят по линии старта на носитель (бумага, ацетатцеллюлозная пленка). Носитель помещают в прибор для электрофореза и подают электрический ток. Буферный раствор, двигаясь в электрическом поле, захватывает молекулы белка. Молекулы с наибольшим отрицательным зарядом и наименьшим размером, т.е. альбумины, двигаются быстрее остальных. Наиболее крупные и нейтральные (‑глобулины) оказываются последними. Через некоторое время (устанавливается для каждого прибора индивидуально) электрофорез заканчивают.
|
|
Полоски бумаги или ацетатцеллюлозной пленки отмывают от буферного раствора и окрашивают. В результате участки, содержащие белок, прокрашиваются, при этом площадь и интенсивность окраски зависят от содержания белковой фракции. В настоящее время количественный учет окрашенных зон на электрофореграмме проводят при помощи денситометра. Работа денситометра основана на пропускании луча света через движущуюся полоску носителя. При изменении интенсивности окраски носителя происходит "всплеск" и регистрируется наличие окрашенной зоны (белковой фракции). Параллельно современные приборы автоматически рассчитывают процентное соотношение белковых фракций.
|
|
