МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

Фармацевтическая промышленность выпускает ряд других препаратов, содержащих в своем составе различные алкалоиды:: винбластин, винкристин,

галантамина гидробромид, гиндарина гидрохлорид, глаувент, дезоксипеганин, колхамин, колхицин, ликорина гидрохлорид, лобелина гидрохлорид, лобесил, лютенурин, пахикарпина гидройодид, платифиллина гидротартрат, сангвиритрин, скополамина гидробромид, табекс, теофиллин, цититон, эфедрина гидро-

хлорид и другие.

9.4.2. Флавоноиды

Флавоноиды – это биологически активные вещества, в основе которых лежит дифенилпропановый фрагмент. Они обнаружены почти у всех лекарственных растений, встречаются у микроорганизмов и насекомых. Содержание флавоноидов колеблется от 0,1 до 20%, а иногда до 30% (цветки софоры японской). В настоящее время выделено и идентифицировано около 4000 флавоноидов.

В растениях флавоноиды содержатся в виде гликозидов, реже – в виде агликонов. Гликозиды флавоноидов не растворимы в холодной воде и растворимы в горячей воде и полярных органических растворителях. Плохую растворимость в холодной воде используют для очистки флавоноидов от полярных веществ растворением в горячей воде и осаждением при охлаждении. Агликоны растворимы в неполярных органических растворителях. При нагревании до 200°С эти соединения возгоняются, а при более высокой температуре разлагаются. Под влиянием ферментов гликозиды флавоноидов расщепляются на сахар и агликон, под действием света и щелочей легко окисляются, изомеризуются и разрушаются.

Флавоноидные соединения выделяют из сухого растительного сырья экстракцией этиловым спиртом, спиртоводными растворами, этилацетатом. Выбор экстрагента определяется числом гидроксильных групп и остатков углеводов в молекуле флавоноида. Экстрагирование проводят методами реперколяции, дробной мацерацией по принципу противотока, методом противотока в батареи перколяторов, вихревой экстракцией. Первичные извлечения при получении новогаленовых флавоноидных препаратов и препаратов индивидуальных веществ концентрируют в вакуум-выпарных аппаратах типа «Симакс» и обрабатывают петролейным эфиром, хлороформом, гексаном, метилен хлоридом для

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

удаления хлорофилла, восков, жирных кислот, терпенов, каротиноидов и других веществ. Затем очищенную вытяжку последовательно обрабатывают диэтиловым эфиром, этилацетатом, пропанолом, бутанолом, получая при этом соответствующие фракции.

Выделение и очистка флавоноидов. Разделение и очистку флавоноидов проводят с применением адсорбционно-хроматографических методов. В качестве сорбентов чаще всего используют окись алюминия, силикагель, целлюлозу, карбоксиметилцеллюлозу и полиамиды.

Колонки с силикагелем, предварительно обработанные раствором борной кислоты, аммиака или фосфатного буфера, элюируют смесью бутанола с разведенной уксусной кислотой, иногда содержащей бензол или хлороформ, либо смесью ацетона с бензолом (1:3). В колонках с порошком целлюлозы используют все проявители, используемые в бумажной хроматографии. Хорошей разделяющей способностью для многих флавоноидов являются смеси бутанолуксусная кислота вода (4:1:2, 4:1:5). Колонки с полиамидом и карбоксиметиленцеллюлозой элюируют сначала водой, затем водными растворами спирта.

С целью изучения возможности использования анионного обмена для разделения полифенольных соединений в Институте фармакохимии им. К.Т. Кутателадзе (Грузия) была исследована кинетика сорбции флавоноидных агликонов (кемпферола, кверцетина и др.) на анионитах ЭДЕ-10П, ИА-1, АВ-17. Наибольшей емкостью по отношению к полифенольным соединениям обладает анионий ИА-1. Установлено также, что сорбция этих веществ на анионитах идет по механизму гелевой диффузии.

Разработан способ разделения флавоноидов с помощью Сефадекса LH-20, в качестве хроматографического носителя при подвижной фазе применяют смесь бутанола-хлороформа-воды в соотношении 9:4:9.

Особенности технологии флавоноидных препаратов.

Ликвиритон – препарат, содержащий сумму флавоноидов (лакразид, глаброзид и др.) из корней и корневищ солодки уральской или солодки голой. Ликвиритон – это желто-бурый аморфный порошок горьковатого вкуса без запаха. Трудно растворим в воде и спирте. Содержит не менее 70% флавоноидов в пересчете на ликуразид.

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

Получение вытяжки проводят методом ремацерации с циркуляционным перемешиванием. Полученную объединенную вытяжку упаривают до 1/3 первоначального объема. Полученный концентрат направляют на стадию очистки.

К кубовому концентрату, разогретому до 75°С в реакторе, вливают горячую (85°С) воду в удвоенном количестве по отношению к объему концентрата, при постоянном перемешивании. Процесс ведут в течение 30 мин при температуре 80°С. Затем охлаждают смесь при включенной мешалке до 60°С, далее, без перемешивания, охлаждение ведут до 20-22°С, а затем охлаждают рассолом до 16-17°С в течение 2 -3 ч. Второе извлечение проводят водой и этанолом. Для этого к разогретому смолистому остатку добавляют равный объем 80-90% спирта отгона и 30-ти кратный объем горячей (80°С) воды. Получают второе извлечение. В 3-й и 4-й раз подают 10-ти кратный объем горячей воды. Пятую экстракцию проводят, как и предыдущие, но не охлаждают, а горячий водный раствор вместе со смолистым осадком сливают в отстойник, из которого водный слой декантируют, а смолистый осадок выгружают в отвал. Объединенные водные извлечения выдерживают в отстойнике в течение 10-15 ч при температуре 16°С для отделения смолистых веществ.

Далее проводят выделение суммы флавоноидов с помощью адсорбции. Для этого готовят батарею адсорберов, заполненных полиамидным сорбентом. Водные извлечения подают через нижний кран хвостового адсорбера (6-го), верх которого соединяют с низом последующего и т.д. до 1-го-головного адсорбера. После пропускания через адсорберы всех водных извлечений проводят промывку батареи водой.

При этом происходит отделение водорастворимых примесей от флавоноидов. Для полного отделения этих примесей необходимо пропустить через батарею 5-ти кратный объем воды по отношению к массе исходного сырья. Контролируют начало выделения суммы флавоноидов (ликвиритона) качественными реакциями. После появления флавоноидов в последних порциях элюата в батарею начинают подавать 20%-этиловый спирт, который десорбирует из адсорбента ликвиритон. Элюаты сорбируют фракциями и передают их на концентрирование. Первые 2-3 фракции содержат мало ликвиритона, поэтому их присоединяют к промывным водам. Последующие фракции собирают до полного выделения этого продукта. Для выделения ликвиритона необходимо использовать для элюирования 8,5-кратный объем 20% этанола (к массе исходно-

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

го сырья). Окончание выделения ликвиритона контролируют качественными реакциями со щелочью и с магнием и соляной кислотой (цианизиновая реакция), а также по снижению концентрации флавоноидов в элюате, по результатам количественного содержания флавоноидов. После выделения ликвиритона проводят десорбцию ликуразида 50% этанолом и десорбцию халкорина 70% этанолом.

Элюаты ликвиритона упаривают до объема 1/16 от массы исходного сырья. В концентрате определяют содержание флавоноидов и передают на сушку. Полученный порошок ликвиритона просеивают, расфасовывают в банки оранжевого стекла и герметично укупоривают. Препарат проявляет спазмолитическое, противовоспалительное и антисекреторное действие. Рекомендован для лечения язвенной болезни желудка и хронического гиперацидного гастрита. Выпускается в виде таблеток.

Рутин получают из бутонов софоры японской и травы гречихи посевной. Производство рутина из бутонов софоры заключается в следующем. Сырье экстрагируют водой при кипячении, затем полученную вытяжку фильтруют через нутч-фильтр и охлаждают 24 часа в кристаллизаторе при 5-80С. При этом выпадают кристаллы рутина, которые центрифугируют, получая рутин-сырец. Оставшееся сырье вышеуказанным способом экстрагируют еще 4 раза, после чего объединяют все фракции рутина-сырца. Объединенные фракции растворяют в 95% спирте этиловом и нагревают до их полного растворения, затем раствор фильтруют и подают в вакуум-выпарной аппарат. В этом аппарате производят отгонку спирта. Полученную густую массу охлаждают в кристаллизаторе до 50С на протяжении 24 часов и центрифугируют. Отфильтрованный рутин обрабатывают ацетоном, снова центрифугируют и полученный чистый рутин сушат в вакуум-сушилке при 60-700С.

Силибор – препарат, содержащий сумму флаволигнанов, получаемых из плодов расторопши пятнистой. Экстракция плодов расторопши осуществляют в батарее из шести экстракторов, последовательно соединенных между собой. Экстракцию ведут методом противотока с периодическим настаиванием в пяти экстракторах, 6-й находится на регенерации и перегрузке. В качестве экстрагента используют 80 % этиловый спирт. Сырье настаивают в течение 15-17 ч. при температуре 25-390С. После настаивания извлечение из первого экстрактора через верхний патрубок вытесняют во второй экстрактор, загруженный из-

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

мельченными плодами расторопши пятнистой, подачей 80 % этилового спирта в нижний патрубок первого экстрактора. Оба экстрактора оставляют для настаивания в течение 15-17 ч при температуре 25-300С.

Аналогично выше описанному заполняют третий, четвертый и пятый экстракторы, каждый раз подавая 80 % этиловый спирт в первый экстрактор. Таким образом, вводят батарею в режим. По истечении времени настаивания, слив извлечения проводят из экстрактора со свежим сырьем (головного экстрактора), при подаче 80 % спирта в экстрактор с истощенным сырьем (хвостовой экстрактор), в сборник. Собранное в сборник извлечение, 6-ти кратное количество по отношению к загруженному в один экстрактор сырью, подают на стадию упаривания в циркуляционный вакуум-выпарной аппарат.

Смолу, полученную на стадии упаривания спиртового извлечения, растворяют в 50 % спирте в соотношении 1:4 и охлаждают до температуры 19200С, а затем с помощью вакуума передают в мерник для отстаивания. Из мерника отстоявшийся от масел и сопутствующих веществ раствор флаволигнановых соединений передают на обезжиривание в реактор.

Обезжиривание спиртоводного раствора от остаточного количества жирного масла проводят четыреххлористым углеродом в реакторе с мешалкой, разделив спиртоводный раствор на две части. Насыщенный маслами четыреххлористый углерод сливают в сборник отработанного четыреххлористого углерода. В реакторе спиртоводный раствор снова обрабатывают четыреххлористым углеродом. Содержимое перемешивают 10 мин. и после разделения фаз четыреххлористый углерод сливают. Обезжиривание проводят еще 2 раза. Отработанный четыреххлористый углерод отправляют на регенерацию.

Для извлечения суммы флаволигнановых соединений из очищенного спиртоводного раствора применяют хлороформно-спиртовую смесь в соотношении 2:1 (спирт-метилен хлорид). Содержимому дают отстояться 40-50 мин. После разделения фаз хлороформно-спиртовое извлечение сливают и вновь отстаивают.

Упаривание хлороформно-спиртового извлечения проводят в циркуляционном вакуум-выпарном аппарате. Упаренное извлечение растворяют в 70 % спирте в десятикратном количестве. Полученные спиртовые извлечения оставляют на 11 часов, затем фильтруют на нутч-фильтре. Профильтрованный спиртовой раствор силибора передают в циркуляционный вакуумный аппарат. Упа-

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

ривание ведут до получения густого экстракта. Сушку проводят в вакуумсушильном шкафу, после чего корж силибора измельчают в шаровой мельнице. Хранят в сухом, прохладном месте, защищенном от света.

Применяют силибор в качестве лекарственного средства при острой и хронической форме заболеваний печени и желчных путей, исключая инфекционный гепатит. Силибор относится к веществам малотоксичным. Препарат является гепатозащитным средством и рекомендован для лечения острых и хронических заболеваний печени и желчевыводящих путей: токсических гепатитов, хронического гепатита, дискинезии желчевыводящих путей. Препарат выпускается в виде таблеток покрытых оболочкой и гранул для детей и является аналогом зарубежных препаратов типа легалона и карсила.

Фламин – препарат, содержащий сумму флавоноидов (флавонол, флавон и флавонон) бессмертника песчаного. Цветки бессмертника экстрагируют 50 % этанолом в батарее из четырех экстракторов методом противотока. Извлечение упаривают в вакуум-аппарате при температуре 65-700С до 1/4 первоначального объема. Образующийся при охлаждении осадок отделяют, растворяют в воде, отстаивают в отстойнике при температуре 1,5-20С в течение пяти часов. В процессе отстаивания смолы выпадают в осадок. Отстоявшийся водный концентрат с помощью вакуума декантируют в сборник, а осадок – смолы из отстойника отправляют в отвал через промежуточный приемник. Отстоявшийся водный концентрат отфильтровывают на нутч-фильтре с помощью вакуума.

Экстракцию флавоноидов проводят смесью этилацетата и этанола (9:1) из отфильтрованного водного концентрата в шестиступенчатой экстракционной установке, состоящей из шести экстракторов, соединенных между собой последовательно. Каждый экстрактор установки имеет камеру смешения и камеру разделения (ротор). В камере смешения с помощью мешалки идет экстракция флавоноидов. В роторе происходит разделение водной среды и этилацетатноспиртовой смеси за счет разности плотностей под действием центробежных сил. После разделения растворы поступают на следующую ступень. Подача растворов в установку осуществляется по принципу противотока в соотношении водный концентрат : смесь – 1:2.

Упаривание этилацетатно-спиртовых извлечений проводят в циркуляционном вакуум-выпарном аппарате. Концентрируют извлечение до получения густого сметанообразного кубового остатка. Сушку кубового остатка осущест-

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

вляют в вакуум-сушильном шкафу. Сухой корж фламина измельчают на мельнице. Хранят в сухом, защищенном от света месте. Применяют как желчегонное и противовоспалительное средство, при холециститах, холангитах и гепатохолециститах.

К другим препаратам флавоноидов, кроме вышеуказанных, также отно-

сятся: аспалин, калефлон, камилофан, кверцетин, конвафлавин, биовиталь, геровитал, фитулвент, марелин, фитолит, рутин, скутэкс, танацехол, флаванобол, фладекс, флакарбин, флакумин, экстракт бессмертника песчаного, экстракт шлемника байкальского, эсфлазид и др.

9.4.3. Кумарины. Хромоны Кумарины – это природные соединения, в основе которых лежит скелет

бензо-α-пирона или производные циклизированной орто-оксикоричной кислоты. Кумарин представляет собой лактон ненасыщенной ароматической о- оксикоричной кислоты, называемой кумариновой кислотой. Кумарины распределяются в растениях неравномерно, количество их колеблется от 0,2 до 10%. Они накапливаются преимущественно в плодах, семенах, корнях, коре, цветках и меньше – в траве и листьях. В одном растении часто можно встретить 5 -10 кумаринов разного химического строения. Кумарины – кристаллические бесцветные вещества иногда белого или слегка желтоватого цвета с запахом, не расщепляются при длительном нагревании в воде, устойчивы в холодных растворах щелочей, но гидролизуются при действии горячих разбавленных растворов гидроксида натрия или калия. Они также хорошо растворяются в органических растворителя: этиловом и метиловом спирте, хлороформе, дихлорэтане, практически не растворимы в воде.

Хромоны – это природные соединения, которые образуются в результате конденсации γ- пиронового и бензольного колец. Известно более 50 производных хромонов.

Выделение и очистка. Для выделения кумаринов и хромонов из растительного сырья используют преимущественно органические растворители: этиловый спирт, метилен хлорид, бензол, диэтиловый и петролейный эфиры, а также сжиженные газы: жидкую двуокись углерода и хладон-12 (фреон). Извлечения лучшего качества получают при использовании этилового спирта.

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

Полученный после отгона экстрагента густой экстракт для очистки и фракционирования обрабатывают растворителями: петролейным эфиром, бензолом и хлороформом. Для освобождения от пигментов и эфирных масел при промышленном производстве экстракты обрабатывают активированным углем. Для очистки от сопутствующих веществ применяют методы хроматографии на колонках сорбентов: оксида алюминия и силикагеля. Кумарины и хромоны из колонок хорошо элюируются смесью органических растворителей.

Из концентрированных экстрактов кумарины и хромоны выделяются в индивидуальном виде с применением кристаллизации, а оставшееся в маточном растворе вещество выделяют с применением адсорбционнохроматографических методов. Этот способ в сочетании с качественным хроматографическим анализом позволяет разделять сложные смеси близких по свойствам веществ и выделять их в индивидуальном состоянии.

Особенности технологии препаратов, содержащих производные кумаринов и хромонов

Ависан – препарат, содержащий очищенную сумму фуранохромонов, включая келлин (до 8 %), а также небольшое количество пирокумаринов и флавонов (акатецин). Измельченные плоды экстрагируют 50 % этанолом. Из экстракта в вакууме отгоняют экстрагент, а сиропообразный остаток высушивают в вакуум-сушильном шкафу при температуре 60-700С до влажности не более 8 %. Сухой остаток измельчают в шаровой мельнице, просеивают. Из 12 килограмм амми зубной получают 1 кг ависана. Ависан – аморфный порошок, жел- то-бурого цвета, горького вкуса, со слабым своеобразным запахом. Гигроскопичен. Выпускается в таблетках по 0,05 г. Применяют как спазмолитическое средство, оказывающее расслабляющее влияние на мускулатуру мочеточников, применяется при спазмах мочеточников, выведении камней, при почечных коликах. Ависан также уменьшает диуретические явления при острых и хронических циститах. Список Б.

Анетин. Суммарный препарат, получаемый из плодов укропа пахучего. Получают путем экстракции измельченных семян укропа 50 % этиловым спиртом по принципу противотока в экстракционной батарее, состоящей из шести экстракторов. Экстракт высушивают и измельчают. Применяется как спазмолитическое средство.