МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

Келлин (Синонимы: Amicardine, Khellinorm, Vissamin, Ammikhelline) –

суммарный препарат, содержащий фуранохромоны и пиранокумарины. Получают из плодов и надземной части амии зубной экстрагированием кипящей водой в соотношении 1:10 в течение 2 часов. Затем вытяжку охлаждают до 25 - 300С и нейтрализуют натрия гидрокарбонатом для перевода фенола в феноляты, что позволяет отделить фенольные соединения от келлина. Далее в вертикальном экстракторе проводят жидкостную экстракцию дихлорэтаном. Полученную вытяжку помещают в вакуум-выпарной аппарат, где отгоняют растворитель. Смолообразный остаток обрабатывают бензином и фильтруют через друк-фильтр. Полученный келлин растворяют при нагревании в 95% спирте этиловом и добавляют активированный уголь. Смесь фильтруют и охлаждают в кристаллизаторе до 0-30С. Мелкокристаллический келлин отфильтровывают на друк-фильтре, промывают спиртом и сушат под вакуумом при 40-500С. Выход продукта составляет 40%.

Применяется при лечении хронической коронарной недостаточности, бронхиальной астмы, а также при спазмах кишечника и желудка. Больным, страдающим стенокардией, назначают для предупреждения приступов, купирующего действия не оказывает. Келлин выпускается в виде таблеток покрытых оболочкой по 0,02 г и ампулах по 2 мл 0,25% раствора. Хранение по списку Б. Келлин входит в состав препарата «Келатрин», «Ависан», «Келаверин», «Фитолит», «Марелин» и «Викалин».

Также к препаратам кумаринов и хромонов относятся аммифурин, берок-

сан, даукарин, пастинацин, псоберан, псорален, фловерин.

9.4.4. Сердечные гликозиды

Это особая группа стероидных веществ производных циклопентанопергидрофенантрена, обладающая уникальной специфичностью действия на сердце, получила название сердечных гликозидов. В малых дозах они оказывают стимулирующее действие на сократительную способность миокарда, благодаря чему широко используются в кардиологии. Среди природных гликозидов сердечные гликозиды занимают особенное место, так как не имеют синтетических аналогов. Около 300 видов растений синтезируют сердечные гликозиды.

В химическом отношении сердечные гликозиды представляют собой ненасыщенные стероидные лактоны, которые имеют специфическую пространст-

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

венную ориентацию молекул. В зависимости от строения лактонного кольца эти соединения подразделяют на две группы: карденолиды и буфадиенолиды. Карденолиды имеют ненасыщенное пятичленное лактонное кольцо. Буфадиенолиды содержат ненасыщенное шестичленное кольцо с двумя двойными связями. Лактонное кольцо обусловливает кардиотоническое действие, так как отсутствие или разрыв кольца приводит к полной потере физиологической активности.

Сердечные гликозиды – бесцветные или белые кристаллические, реже аморфные, вещества без запаха, горькие на вкус, оптично активные, имеющие температуру плавления 100-270 оС. Большинство из них мало растворимы в воде, хорошо растворимы в водных растворах метилового и этилового спирта, хуже – в хлороформе и дихлорэтане, не растворимы в петролейном эфире и бензине, склонны к гидролизу. Сердечные гликозиды, за редким исключением, являются нейтральными соединениями. В то же время они чувствительны к действию как кислот, так и щелочей. Поэтому эти свойства сердечных гликозидов необходимо учитывать при их выделении.

Выделение и очистка сердечных гликозидов. Методы выделения сер-

дечных гликозидов из растений имеют более чем столетнюю историю и непрерывно совершенствуются. Именно растения продолжают оставаться единственным промышленным источником их получения.

Химическая нестабильность, большая чувствительность к действию Кислот, оснований, ферментов затрудняет выделение гликозидов. Поэтому выделение и очистка сердечных гликозидов основаны на щадящих методах их выделения и очистки. Экстракцию сердечных гликозидов из растений, учитывая их растворимость, обычно осуществляют органическими растворителями (как правило, 30-70% этиловым спиртом), предварительно проведя обезжиривание сырья бензином или петролейным эфиром. Затем вытяжку сгущают и переводят гликозиды в водный или водно-спиртовый раствор. После очистки извлечения от смол и хлорофилла гликозиды экстрагируют органическими растворителями, которые не смешиваются с водой, и упаривают извлечение. Очищают вытяжку ацетатом свинца или гидроксидом алюминия и извлекают гликозиды из водного раствора органическими растворителями разной полярности (диэтиловый эфир, хлороформ, смесь хлороформа и этанола). Затем проводят их хроматографическое разделение и кристаллизацию. Процесс экстрагирования сер-

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

дечных гликозидов достаточно сложный и многостадийный, но оправдывает себя качеством очистки сердечных гликозидов от многочисленных сопутствующих веществ.

Особенности технологии препаратов сердечных гликозидов.

Адонизид. Это прозрачная, слегка желтоватого цвета жидкость, своеобразного запаха, горького вкуса. В 1 мл содержится 23-27 ЛЕД, или 2,7-3,5 КЕД.

Его получают из травы адониса весеннего (горицвета или черногорки) по технологии, разработанной Ф.Д.Зильберг (ВНИХФИ, г. Москва). Измельченную траву горицвета весеннего (активность не менее 50-66 ЛЕД в 1 г) экстрагируют циркуляционным способом в аппарате типа Сокслета. В качестве экстрагента используют смесь, состоящую из 95 частей хлороформа и 5 частей 96% этанола (или 95 ч четыреххлористого углерода и 5 ч 96% этанола) по объему. Указанные экстрагенты получили названия «универсальных», так как относительно хорошо извлекают все сердечные гликозиды. В то же время сопутствующие гидрофильные вещества переходят в эти смеси в незначительных количествах. Экстракцию растительного сырья проводят до полного извлечения гликозидов (отсутствие сердечных гликозидов определяют по отрицательной реакции Легаля). В полученном извлечении наряду с гликозидами (адонитоксин, цимарин и др.) содержатся хлорофилл, органические кислоты, смолоподобные вещества и др. Отделение суммы гликозидов от основной массы гидрофобных сопутствующих веществ осуществляют путем смены растворителя. Для этого из полученного извлечения отгоняют экстрагент при температуре не выше 60оС и разрежении не менее 450 мм. рт. ст. Когда кубовый остаток в исп а- рителе по массе приблизительно будет равен взятому количеству сырья, к нему добавляют равное количество воды и продолжают упаривание до полного удаления хлороформа и этанола. При этом в осадок выпадают все нерастворимые в воде вещества (хлорофилл, смолы и др.). Водный раствор, содержащий сумму гликозидов, небольшое количество пигментов и других сопутствующих веществ, сливают и фильтруют на нутч-фильтре через двойной слой фильтровальной бумаги и слой алюминия оксида толщиной 1-1,5 см. Эта операция служит для удаления оставшихся в растворе сопутствующих веществ, причем алюминия оксид практически не адсорбирует сердечные гликозиды, и они переходят в фильтрат.

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

В фильтрате определяют биологическую активность. Из 275 кг травы горицвета (50-60 ЛЕД) получают около 100 кг концентрата адонизида (100-200 ЛЕД в 1 мл). После этого к концентр ату добавляют этанол, хлорбутанолгидрат и воду в таком количестве, чтобы в 1 мл конечного продукта содержалось 20 % этанола, 0,5 % хлорбутанолгидрата и 23-27 ЛЕД. Препарат предназначен для внутреннего применения и выпускается во флаконах темного стекла по 15 мл. Хранят адонизид по списку Б. Препарат контролируют ежегодно. Применяют в качестве сердечного (кардиотонического) средства.

Адонизид-концентрат с активностью 85-100 ЛЕД в 1 мл и содержанием этанола не менее 20 % выпускается в бутылях, как полуфабрикат, который входит в состав препаратов «Кардиовален» и «Кардиофит». Список А.

«Сухой адонизид» предложен Н.А. Бугрим и Д.Г. Колесниковым (ГНЦЛС, г. Харьков). Он получен дополнительной очисткой адонизидаконцентрата. Сумму гликозидов экстрагируют из водного раствора хлороформ- но-этанольной смесью (2:1). Полученное извлечение упаривают, остаток растворяют в 20 % этиловом спирте и раствор пропускают через колонку, заполненную алюминия оксидом сорта «для хроматографии». Колонку промывают 20 % этанолом до отрицательной реакции подлинности в элюате. Из объединенных элюатов и фильтрата экстрагируют гликозиды хлороформноэтанольной смесью (2:1). Извлечение обезвоживают высушенным натрия сульфатом, упаривают в вакууме досуха, остаток растворяют в 95 % этаноле. Из полученного раствора гликозиды осаждают эфиром. Осадок отделяют и сушат. Получают аморфный желтый порошок горького вкуса, негигроскопичный, стойкий при хранении в обычных условиях. Выход из 2 кг адонизидаконцентрата (85 ЛЕД в 1 г) составляет 8,1-8,5 г адонизида сухого. Биологическая активность препарата 14000-20000 ЛЕД в 1 г. Применяют для приготовления таблеток, содержащих по 0,00075 г адонизида, активность 1 таблетки 10-15 ЛЕД. Одним из таких препаратов являются таблетки «Адонис-бром».

Лантозид получают из листьев наперстянки шерстистой (активность не менее 60 ЛЕД в 1 г). Листья измельчают и экстрагируют 24 % этанолом в 2 эк с- тракторах. В экстрактор № 1 загружают 50 кг сырья, заливают 8-кратным количеством этанола и настаивают в течение 16-20 ч. Для ускорения диффузии растворитель циркулирует 2-3 раза. Полученный экстракт в количестве 300 л сливают в отстойник для осаждения сопутствующих веществ. В экстрактор № 1

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

заливают новую порцию 24 % этанола в количестве 400 л и настаивают 16-20 ч. Затем ее сливают и используют в качестве экстрагента свежей порции сырья, загруженного в экстрактор № 2. Через 16-20 ч извлечение из экстрактора № 2 сливают в отстойник для осаждения сопутствующих веществ, а в него снова заливают 400 л 24 % этанола и оставляют для настаивания на 16-20 ч, после чего экстракт сливают и используют для следующей порции сырья.

Из отработанного сырья в экстракторе № 1 рекуперируют этанол, в него загружают новую порцию сырья и настаивают с извлечением, полученным из экстрактора № 2 и т.д. Последующую экстракцию проводят так же, как описано выше. В каждой отдельной порции водно-этанольного экстракта в количестве 300 л осаждают сопутствующие вещества 40 % водным раствором свинца уксуснокислого, который прибавляют постепенно по 1,0-1,5 л при перемешивании. Всего на осаждение расходуется 20 л раствора свинца уксуснокислого. По достижении полноты осаждения, которая определяется по отсутствию помутнения пробы при прибавлении к ней нескольких капель раствора свинца уксуснокислого, образовавшийся аморфный осадок отстаивают 18-20 ч. Прозрачный раствор сифонируют, а оставшуюся часть вместе с осадком отфильтровывают через бельтинг. Раствор объединяют с фильтратом и обрабатывают для осаждения ионов свинца 25 % раствором натрия сульфата, добавляя его порциями по 0,5 л. На полное осаждение ионов свинца расходуется 12 л раствора.

Из очищенного водно-этанольного экстракта гликозиды извлекают органическим растворителем. Для этого 200 л экстракта и 20 л смеси метилен хл о- рида и этанола (3:1) перемешивают в аппарате с мешалкой в течение 30 мин, затем на 30 мин оставляют для расслаивания и отстоявшийся нижний слой раствора гликозидов в метилен хлориде сливают. Операцию повторяют 3 раза, каждый раз загружая в аппарат по 20 л смеси метилен хлорида с этанолом (3:1). Экстракт обезвоживают высушенным натрия сульфатом, отгоняют растворитель при температуре 37-40 0С и вакууме. Кубовый остаток в количестве 1,5-2,0 л сливают в кристаллизатор и помещают в вытяжной шкаф. По мере испарения метилен хлорида выделяется сумма гликозидов в количестве 285,8 г. Гликозиды растворяют в 3 л 96 % этанола и определяют биологическую активность. На основании полученного анализа в раствор добавляют этанол и воду с таким расчетом, чтобы активность препарата составляла 10-12 ЛЕД в 1 мл, а содержание этанола - 68-70 %. Полученный раствор фильтруют на фильтр-прессе через

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

стерилизующие пластины. Технология препарата разработана в ВИЛАР (г. Москва).

Лантозид выпускают во флаконах-капельницах по 15 мл. Хранят по списку Б. Применяют главным образом в амбулаторной практике для поддерживающей терапии при хронической недостаточности кровообращения.

Коргликон получают из травы ландыша майского и его географических разновидностей – закавказского и дальневосточного. Технология препарата разработана в ГНЦЛС (г. Харьков).

Траву ландыша (биологическая активность не менее 120 ЛЕД) экстрагируют 80 % этанолом в батарее из 4 экстракторов методом противотока. В первый экстрактор загружают 45 кг травы, 3,0 кг кальция карбоната, 0,3 кг кальция о к- сида, заливают 250 л 80 % этанола. Через 8 -10 ч извлечение из первого экстрактора передавливают во второй подачей в него свежего экстрагента. После заполнения всех экстракторов и по истечении нужного времени настаивания в последнем экстракторе собирают экстракт со скоростью 20 л/ч. Его подают в вакуумвыпарной аппарат и полностью отгоняют этанол при температуре 50-60 0С и вакууме. К кубовому остатку прибавляют раствор 10 г квасцов алюмокалиевых в 50 мл воды очищенной и отстаивают в течение 3 -5 ч. Отстоявшийся раствор отделяют от смол фильтрованием через марлю. Смолу промывают раствором натрия хлорида (0,3 кг на 20 л воды) до полного извлечения из нее гликозидов.

Водный раствор гликозидов фильтруют на нутч-фильтре через один слой бязи и два слоя фильтровальной бумаги и передают на адсорбционную колонку из нержавеющей стали, высотой 75 см, диаметром 30 см, заполненную 18 кг алюминия оксида второй группы активности. Через колонку последовательно пропускают раствор гликозидов, промывные воды и 40 л обессоленной воды. При этом водный раствор гликозидов полностью очищают от дубильных веществ. Прошедший через колонку раствор должен иметь значение рН 6,0-7,0; если оно ниже 6,0, раствор нейтрализуют натрия гидрокарбонатом.

Гликозиды из водного раствора переводят в органический растворитель, повторно обрабатывая его хлороформом до обесцвечивания последнего, а затем смесью хлороформ-этанол (3:1), при добавлении аммония сульфата, до полного извлечения гликозидов. Хлороформно-этанольное извлечение обезвоживают высушенным натрия сульфатом и упаривают при температуре 70-800С. К кубовому остатку в количестве 6 л прибавляют 0,5 кг высушенного натрия сульфата

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

и 0,1 кг угля активированного, оставляют на 2 ч и фильтруют через фильтровальную бумагу. Очищенный кубовый остаток упаривают при температуре 80900С и вакууме. Сухой остаток растворяют в 3 л воды очищенной, фильтруют и подают на колонку, заполненную 3 кг алюминия оксида I-II группы активности. Колонку промывают водой очищенной. Из очищенного водного раствора гликозиды извлекают хлороформно-этанольной смесью (4:1). Извлечение обезвоживают высушенным натрия сульфатом и сгущают под вакуумом до 1 л кубового остатка. К нему приливают эфир этиловый, быстро перемешивают и эфир сливают. Остаток растворяют в 1,3 кг ацетона, добавляют 0,1 кг угля активированного и фильтруют. Фильтрат упаривают до консистенции экстракта густого. Экстракт растирают с безводным эфиром, эфир сливают и операцию повторяют 5-7 раз до получения тонкого аморфного порошка, который растирают до полного удаления эфира и сушат на воздухе. Выход коргликона – 100 г, с активностью 19000-27000 ЛЕД в 1 г.

Препарат выпускают в виде 0,06 % раствора для инъекций в ампулах по 1 мл (активность 11-16 ЛЕД). Раствор готовят с добавлением консерванта - 0,4 % хлорбутанолгидрата, стерилизуют фильтрованием через мембранные фильтры с диаметром пор не более 0,3 мкм. Хранят по списку Б. Применяют внутривенно, при острой сердечной недостаточности.

Дигитоксин получают путем ферментации листьев наперстянки пурпурной, экстрагирования из них действующих веществ, очистки вытяжки, выделении суммы гликозидов, получении дигитоксина, стандартизации.

Предварительная ферментация листьев увеличивает выход дигитоксина в 4 раза. С этой целью измельченные листья наперстянки замачивают водой (37400С) и оставляют при этой температуре на 40-48 ч. Листья после ферментации помещают в реактор с мешалкой и трижды экстрагируют смесью метилен хлорида и этанола. Полученную вытяжку упаривают под вакуумом при температуре 500С. Концентрированный экстракт обрабатывают формамидом и проводят очистку (жидкостную экстракцию), обрабатывая вытяжку бензолом 5 раз, смесью бензола и хлороформа (3:2) до 10 раз. Вытяжку упаривают под вакуумом, остаток растворяют в хлороформе. Хлороформный раствор сердечных гликозидов переносят на колонку с алюминия оксидом для их разделения: в верхнем участке – гитоксин, в нижнем – дигитоксин.

МАКСИМАЛЬНО-ОЧИЩЕННЫЕ И ПРЕПАРАТЫ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ

Дигитоксин элюируют с алюминия оксида метанолом под контролем УФлампы. Дигитоксин имеет голубое свечение, гитоксин - коричневое. Элюат, содержащий дигитоксин, упаривают под вакуумом досуха. Остаток растворяют в ацетоне, упаривают под вакуумом, добавляют бензол и оставляют для кристаллизации дигитоксина. Перекристаллизацию повторяют несколько раз при комнатной температуре. Кристаллы промывают этанолом и высушивают на воздухе.

Дигитоксин – белый кристаллический порошок, практически нерастворимый в воде, мало растворим в этаноле и хлороформе, очень мало в эфире. 1,0 г должен содержать 8000-10000 ЛЕД. Формы выпуска: таблетки по 0,0001 г и свечи по 0,00015 г. Хранение по списку А.

Целанид, дигоксин получают из листьев наперстянки шерстистой. Целанид выделяют из смеси гликозидов методом жидкостной экстракции.

Готовят две фазы: тяжелую - с плотностью, равной 1,3150 (дихлорэтан и хлороформ), и легкую – с плотностью 0,9460 (метанол и вода). Смешивают обе фазы в соотношении 1:1 и растворяют кристаллы гликозидов – дигиланидов А, В, С. В тяжелой фазе остаются дигиланиды А и В, в легкую переходит дигиланид С. Эту фазу фильтруют через стеклянный фильтр №3, промывают холодной водой (5-100С) и кристаллизуют, затем многократно перекристаллизовывают из этанола и сушат под вакуумом. 1,0 г целанида должен содержать 14000-16000 ЛЕД. Это белый кристаллический порошок, очень мало растворим в воде и этаноле. Формы выпуска: таблетки по 0,00025 г и растворы для инъекций 0,02 % и 0,05 %. Хранение по списку А в герметически закрытых банках оранжевого стекла.

Дигоксин представляет собой вторичный гликозид. Его получают путем ферментативного и щелочного гидролиза целанида. В качестве экстрагента используют 90 % метанол. Вытяжку подвергают многократной очистке путем смены растворителей, экстракции в системе жидкость-жидкость и хроматографирования на алюминия оксиде. Из очищенного раствора на холоду выпадает кристаллический осадок, представляющий собой сумму гликозидов (дигиланиды А, В, С) – технический продукт. Его растворяют в этаноле при нагревании с углем активированным и оставляют на холоду для кристаллизации. Выпавшие кристаллы представляют собой смесь нативных гликозидов (дигиланиды А, В, С). Стандартизацию проводят биологическим путем. 1,0 г препарата должен содер-