Айала ф., Кайгер Дж. Современная генетика: в 3-х т. Т. 2. Пер. С англ.: – м.: Мир, 1988. – 368 с.

18. Генетика соматических клеток: картирование генома 305

Рис. 18.12. А. Клетки фибробластов человека, содержащие микронуклеусы. Б. Смесь клеток, микроклеток (яркие) и фрагментов цитоплазмы. В. Нуклеусы, включающие одну или несколько хромосом, окруженные тонким слоем цитоплазмы и плазматической мембраной. При фильтрации смеси, показанной на фото Б, через трехмикронный фильтр самые мелкие микроклетки вместе с небольшими фрагментами (В) цитоплазмы удается отделить от более крупных микроклеток и целых клеток. (По McNeil С. А., Brown R. L., 1980, PNAS, USA, 77, 5394-5398.)

Айала ф., Кайгер Дж. Современная генетика: в 3-х т. Т. 2. Пер. С англ.: – м.: Мир, 1988. – 368 с.

Рис. 18.13. Распределение флуоресценции нормальных хромосом человека, полученное с помощью прибора, позволяющего разделить хромосомы на основе различий в уровне флуоресценции. Числа над пиками обозначают номера хромосом человека. Удается получить фракции, содержащие одну-две индивидуальные хромосомы. (По Zebo R. V. et al., 1979. Proc. Natl. Acad. Sei USA, 76, 5804-5808.)
Рис. 18.14. Впервые перенос генов с помощью целых хромосом был использован для встраивания генетического материала китайского хомячка в клетки мыши. На рисунке клетки мыши содержат дефект в гене HPRT. Трансформированные клетки мыши, выросшие на среде HAT, должны содержать ген HPRT хомячка. (По Klobutcher Z. Α., Ruddl F.H., 1981. Annu. Rev. Biochem., 50, 533-554.)

Айала ф., Кайгер Дж. Современная генетика: в 3-х т. Т. 2. Пер. С англ.: – м.: Мир, 1988. – 368 с.

18. Генетика соматических клеток: картирование генома 307

Рис. 18.15. Для картирования генов после трансфекции необходима цитологическая идентификация перенесенного фрагмента хромосомы в клетках, отобранных по активности исследуемых генов. В различных клеточных линиях могут находиться фрагменты разной длины.

ванных фрагментов данной хромосомы, различающихся по величине, можно определить синтению и порядок генов. Естественно, это возможно тогда, когда гены, отсутствующие в малых фрагментах, выявляются при встраивании фрагментов большего размера (рис. 18.15).

Кроме такого прямого подхода, порядок генов и их относительное сцепление можно изучать по частотам котрансформации этих генов. Такие эксперименты сводятся к измерению частот совместного встраивания в геном одной клетки двух разных генов. Гены, кодирующие галактокиназу (GALK), растворимую тимидинкиназу (ТК1), и проколлаген l (COLM), расположены в длинном плече хромосомы 17 (рис. 18.16). При исследовании линий, трансформированных по маркеру ТК1, определено, что частота котрансформации для GALK равна 19% (5 из 27 трансформантов). Для COLM частота котрансформации с ТК1 равна 74% (20 из 27). Отсюда следует, что ген ТК1 расположен на хромосоме 17 ближе к гену COLM, чем к GALK. Расстояния между генами могут быть рассчитаны в единицах переноса генов, опосредованного хромосо-

Рис. 18.16. Карта сегмента хромосомы 17 человека, построенная по результатам переноса генов в составе транслоцированных фрагментов хромосомы. (По Klobutcher Ζ. Α., Ruddle E.H., 1981. Annu. Rev. Biochem., 50, 533-534.) Дополнительные данные указывают на то, что локус COLM находится вне фрагмента GALK—TK1.