Айала ф., Кайгер Дж. Современная генетика: в 3-х т. Т. 2. Пер. С англ.: – м.: Мир, 1988. – 368 с.

310 Экспрессия генетического материала

Рис. 18.17. Картирование клонированных генов человека при использовании гибридов соматических клеток мыши и человека с помощью блот-гибридизации по Саузерну. Присутствие хромосом человека определяется при цитологическом изучении гибридных клеток. Ферменты, служащие маркерами данных хромосом, выявляются с помощью гель-электрофореза. Рестрикционные фрагменты ДНК, выделенной из гибридной линии, разделяют электрофорезом в агарозном геле и переносят на нитроцеллюлозный фильтр. На этом фильтре проводят их гибридизацию с зондом, меченным радиоактивными изотопами. (По Shows T.B. et al, 1982. Adv. Hum. Genet., 12, 341-452.)

Айала ф., Кайгер Дж. Современная генетика: в 3-х т. Т. 2. Пер. С англ.: – м.: Мир, 1988. – 368 с.

18. Генетика соматических клеток: картирование генома 311

Рис. 18.18. Анализ гибридных клеток по методу Саузерна. ДНК гибридных клеток мышь— человек обрабатывали рестриктазой Hin dIII и гибридизовали с зондом протяженностью 900 п. н., содержащим вирусный онкоген туc. На первой дорожке электрофореграммы гибридизуется полоса, соответствующая по-	зиции фрагмента ДНК человека, на второй - фрагмента ДНК мыши. На дорожках 3-13 фракционированы фрагменты ДНК из гибридных линий. Последовательности человека, гомологичные туc, присутствуют в клонах 3, 5, 6, 9, 11 и 12. (По Sakaguchi A. Y. et al. 1983. Somatic Cell Genetics, 9, 391-405.)

ствующие рестрикционным фрагментам, содержащим последовательности ДНК, гомологичные данному зонду (рис. 18.18). Гены соотносят с определенными хромосомами человека на основании корреляции между присутствием данной хромосомы в гибридной клеточной линии и наличием гибридизующегося фрагмента человеческой ДНК на радиоавтограмме. Данный метод более чуствителен, чем гибридизация ДНК в растворе и, главное, более специфичен.

Результаты эксперимента по картированию гена химотрипсиногена В (CTRB) приведены в таблице 18.3. «Плюсы» и «минусы» во втором столбце таблицы отражают результаты гибридизации по Саузерну. Следующие столбцы таблицы указывают на присутствие тех или иных хромосом человека в гибридных линиях. Единственная хромосома, которая имеется во всех гибридных клеточных линиях, дающих положительный ответ в блот-гибридизации, и отсутствует в линиях, дающих отрицательный ответ, - это хромосома 16.

Метод гибридизации по Саузерну, соединенный с подходами, разработанными для генетического анализа соматических клеток, с успехом применялся не только для картирования определенных генов (табл, 18.4), но и для локализации последовательностей ДНК с неизвестными функциями, найденными в библиотеках генов человека.

Айала ф., Кайгер Дж. Современная генетика: в 3-х т. Т. 2. Пер. С англ.: – м.: Мир, 1988. – 368 с.

372 Экспрессия генетического материала

Таблица 18.3. Локализация гена химотрипсиногена в хромосоме 16
	Линия клеток	Экспрессия химотрипсиногена В	Хромосомы, присутствующие в клеточной линии
			1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20	21	22	X
1.	TSL-2	-	-	+	-	-	+	+	-	-	-	+	-	+	-	-	-	-	-	+	-	+	+	-	+
2.	ICL-15	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	+	-	-	-	-	+	-	-	+	+	-	-
3.	XER-11	+	+	-	+	+	-	+	+	+	+	+	-	+	-	-	+	_+	+	+	+	+	+	+	-
4.	XER-7	-	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	-	+	+	+	+	-	-	+	+	-	-	-	+
5.	EXR-3	+	+	+	+	+	+	+	+	+	-	+	+	+	+	+	+	+	+	+	-	+	+	+	-
6.	XER-9	-	-	+	+	+	-	-	-	+	-	+	-	+	-	+	-	-	+	+	-	-	+	-	-
7.	EXR-9	+	+	+	+	+	+	+	+	+	-	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	-
8.	MAR-2	+	+	+	-	+	-	-	+	-	-	+	-	-	-	-	+	+	+	-	+	+	+	+	+
9.	DUA-5 BSAgA	-	-	-	+	-	+	-	-	-	-	-	-	-	-	+	-	-	+	+	-	-	+	-	-
10.	XTR-22	-	-	+	-	+	+	+	-	+	-	+	+	-	+	-	+	-	-	+	+	+	+	+	-
11.	REX-12	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	+
12.	ALR-1BSH6	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	+	-	-	+	+	+	-	+