Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопическое исследование материала от больного с целью обнаружения бледной трепонемы:

• изучение препарата "раздавленная капля" (тканевой сок из твердого шанкра) методом темнопольной микроскопии (демонстрация). Обратить внимание на наличие в поле зре­ния микроскопа тонких, извитых спирохет с 10-12 равномер­ными завитками. Отметить типичные маятникообразные и по­ступательные движения бледной трепонемы.

• изучение тушевого препарата (по Бурри) из материала от больного (тканевой сок из твердого шанкра);

2. Серологическая диагностика сифилиса.

• Учет РСК с кардиолипиновым и специфическим трепонематозным антигеном (демонстрация).

• Постановка и учет реакции микропреципитации с инактивированной сывороткой крови больного с подозрением на си­филис. Компоненты реакции:

- инактивированная сыворотка крови больного А

- инактивированная сыворотка крови больного Б

- инактивированная сыворотка крови больного В

- контрольная положительная сыворотка крови

- кардиолипиновый антиген

- изотонический раствор хлорида натрия,

Методика постановки микрореакции: В лунки планшета для иммунологических реакций внести по 3 капли сывороток крови больных А,Б,В и контрольной положитель­ной. В каждую лунку добавить по I капле кардиолипинового анти­гена, для перемешивания ингредиентов встряхивать планшет 5 ми­нут. Внести во все лунки по 3 капли изотонического раствора хлорида натрия. Перемешать, покачивая планшет, и оставить на столе на 5 минут. Учет результатов произвести после появления хлопьев в лунке с контрольной положительной сывороткой (план­шет рассматривать над лампой на столе),

• учет результатов ИФА с сыворотками крови больных А, Б, В с подозрением на сифилис (демонстра­ция). В верхнем ряду лунок планшета поставлены контроли:

- контроль положительной сыворотки (2 лунки, коричневое окрашивание),

- контроль отрицательной сыворотки (2 лунки, светло-бе­жевое окрашивание),

- контроль конъюгата (2 лунки, светло-бежевое окрашивание),

- контроль субстратной смеси (4 лунки, коричневое окрашивание).

Во 2-4 рядах лунок исследуются сыворотки крови больных А (2-й ряд), Б (3-й ряд) ,В (4-й ряд) в разведении 1:200. Результаты реакции оценивают по изме­нению цвета смеси со светло-бежевого в коричневый.

• РИФ. На предметном стек­ле готовят мазок из культуральных трепонем, затем нано­сят исследуемую сыворотку больного в разведении I; 200 на 30 мин, промывают препарат забуференным физиологичес­ким раствором и докрашивают мазок флюоресцирующей сывороткой против глобулинов человека. Препарат исследуют в лю­минесцентном микроскопе, отмечая интенсивность свечения трепонем. Реакция высокочувствительна и специфична.

• РИТ. Сущность реакции состоит в подавлении движения бледных трепонем (иммоби­лизация) антителами сыворотки крови больного в присут­ствии комплемента. С этой целью к взвеси тканевых спиро­хет добавляют исследуемую сыворотку больного и свежий комплемент. Параллельно ставят 2 контрольные пробы, в одной вместо исследуемой сыворотки берут сыворотку крови здорового человека, в другой вместо свежего комплемента инактивированный. Выдерживают все пробы в анаэробных условиях, готовят препарат "раздавленной капли" и исследуют с помощью микроскопии в темном поле, определяя количество подвижных и неподвижных трепонем. Расчет процента иммобилизации трепонем (ПИТ) осуществляют по формуле:

(А-B)х100

А

где А - количество подвижных трепонем в контроле (с неактивным комплементом), B - число подвижных трепонем в опыте. Если процент иммобилизации выше 50, результат положителен.

• РНГА с эритроцитарным трепонемным антигеном (демонстрация)