Самостоятельная работа студентов

Изучение морфологии Helicobacter pylori (грамотрицательные спиралевидные бактерии - демонстрация).

Учет культуральных свойств Helicobacter pylori на эритрит-агаре (серые, плоские, прозрачные сливаю­щиеся колонии с неровным краем - демонстрация).

Учет уреазной активности Helicobacter pylori (отметить изменение цвета индикатора, свидетельствующее об изменении рН среды на щелочную в результате разложения мочевины с образованием аммиака).

Учет ИФА по определению антител класса IgG к геликобактеру (демонстрация).

Тема 7. Микробиология бактериальных кишечных инфекций: возбудители дизентерии, холеры. Пищевые интоксикации бактериальной природы Лабораторная диагностика бактериальной дизентерии.

Дизентерия — антропонозное инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода Shigella, характеризующееся язвенным поражением толстого кишечника и общей интоксика­цией организма. Классификация возбудителей дизентерии (шигелл) представлена в таблице 12, методы микробиологической диагностики в схеме 13.

Таблица 13. Классификация шигелл

Виды шигелл	Серовары шигелл
Shigella dysenteriae	1-12
Shigella flexneri	1a, 1b, 2a, 2b, 3a, 3b, 4a, 4b, 5,6, var X, var Y
Shigella boydii	1-18
Shigella sonnei	-

С

Материал для исследования:испражнения больных, реконвалесцентов, носителей, рвотные массы, промывные воды желудка и кишечника, а также смывы с рук и с объектов внешней среды, пищевые продукты (особенно молоко).

Бактериологический метод

1 день.Посев материалана среды Плоскирева, Эндо и на селенитовую среду накопления. Культивирование в течение суток при 37⁰ С.

2 день. Учет характера роста на средахПлоскирева и Эндо (бесцветные лактозоотрицательные гладкие колонии). Пересев типичной лактозоотрицательной колонии шигелл на среду Олькеницкого или Ресселя для выделения чистой культуры.

3-й день. Учет характера роста на средах Ресселя или Олькеницкого (пожелтение столбика среды в результате ферментации глюкозы в анаэробных условиях; скошенная часть среды без изменений- отсутствие ферментации лактозы) Проверка чистоты выделенной культуры, определение вида и серовара по антигенной структуре с помощью ОРА. Пересев в среды «пестрого» ряда для изучения биохимических свойств, посевы для определения фаголизабильности, фаговара, колициновара, устойчивости к антибиотикам. .

4-й день. Учет результатов развернутой РА, изменений в средах «пестрого» ряда, фаголизабильности, фаговара, колициновара. Формулировка ответа

хема 12. Микробиологическая диагностика дизентерии

Экспресс-методы (индикация патогенной E.coli или ее продуктов в исследуемом материале)

ДНК-зонды или ПЦР для выявления специфического фрагмента ДНК шигелл,

РИФ

Серологический метод. Постановка ра, рнга с целью выявления антител к шигеллам и их динамики (исследование парных сывороток) в процессе инфекции.

Микроскопический метод при дизентерии не применяет­ся ввиду морфологического сходства шигелл с другими энтеробактериями.

Бактериологический метод является основным методом лабораторной диагностики дизентерии. Исследуемый материал засевают на среды Плоскирева и Эндо в чашках Петри, а также на селенитовую среду для накопления, с которой через 16— 18 ч делают пересев на указанные плотные питательные среды. Посе­вы выращивают в термостате при 37⁰ С 18 — 24 часов.

На второй день изучают характер колоний. Бесцветные лактозоотрицательные гладкие колонии шигелл пере­севают на одну из полиуглеводных сред (Олькеницкого, Ресселя, Клиглера) для накопления чистой культуры. На 3-й день учитывают характер роста на полиуглеводной среде, а также пересе­вают материал на дифференциальные среды (Гисса и др.) для биохимической идентификации выделенной куль­туры. Определяют антигенную структуру выделенной культуры с помощью ОРА с целью ее идентификации до уровней вида и серовара. На 4-й день учитывают результаты биохими­ческой активности (табл. 14).

Таблица 14. Биохимические свойства шигелл

Виды шигелл	Ферментация						индол
	глюкозы	лактозы	маннита	дульцита	ксилозы	орнитина
S. dysenteriae	к	-	-	-	-	-	-
S. flexneri	к	-	к	-	-	-	-
S. boydii	к	-	к	-	±	-	-
S. sonnei	к	±	к	к +	±	к	+

Обозначения: «к» – ферментация субстрата с образованием кислоты, «+» - наличие признака, «-« - отсутствие признака, «±» - непостоянный признак.

Шигеллы, в отличие от эшерихий, являются неподвижными микроорганизмами, они не ферментируют лактозу, глюкозу разлагают без образования газа, не декарбоксилируют лизин. Для серотипирования сначала ставят РА на стекле со смесью сывороток против пре­обладающих в данной местности видов и вариантов шигелл, а затем РА на стекле с монорецепторными видовыми сыворотками. Определяют также чувствительность выделенной культуры к поливалентному дизентерийному бактериофагу и антибиотикам. С эпидемиологи­ческой целью определяют фаговар и колициновар выделенных шигелл. Одним из свойств шигелл является их способность вызывать кератит у морских свинок (кератоконъюнктивальная проба)

Серологический метод. Для определения антител в крови больных дизентерией (обычно хронической формой) применяют РНГА с эритроцитарны­ми шигеллезными диагностикумами. Диагностические титры: к шигеллам Флекснера у взрослых - 1:400, у детей до 3 лет - 1:100, у детей старше 3 лет - 1:200, к остальным шигеллам - 1:200. Реакцию ставят, как правило, повторно с сыворот­кой крови, взятой не менее чем через 7 дней; диагностическое значение имеет нарастание титра антител в четыре и более раз.

Экспресс-методы при дизентерии - прямая и непрямая РИФ, реакция ко-агглютинации, ИФА, РНГА с антительными эритроцитарными диагностикумами для быстрого обнаружения шигелл в исследуемом материале (обычно в фекалиях), а также ПЦР.