3. Ознакомиться с препаратами для диагностики и лечения сифилиса:

• специфический антиген из тканевых трепонем, разрушенных ультразвуком, для РСК;

• неспецифический кардиолипиновый антиген - экстракт липидных фракций бычьего сердца для постановки реакции Вассермана (РСК);

• антибиотики: пенициллин, цефотаксим, тетрациклины, эритромицин.

Микробиологическая диагностика мягкого шанкра

Материалом для исследования является отделяемое язвы – мягкого шанкра.

Микроскопический метод заключается в исследовании препаратов из отделяемого мягкого шанкра, окрашенных по Граму и метиленовым синим. Возбудитель мягкого шанкра (Haemophilus ducreyi) выглядит в виде длинных цепочек грамотрицательных палочек.

Бактериоскопический метод осуществляют путем посева материала на кровяные питательные среды, на которых Haemophilus ducreyi через 48-72 часа образует мелкие круглые колонии, окруженные зоной гемолиза. Идентификацию выделенной культуры проводят на основании изучения биохимических (посев на среды «пестрого» ряда) и антигенных (постановка РА на стекле) свойств.

Микробиологическая диагностика гонореи

Возбудителем гонореи является Neisseria gonorrhoeaе, вызывающая острые и хронические воспалительные поражения мочеполовых органов, слизистой оболочки ротоглотки и конъюнктивы глаза.

Материалом для исследования является гнойное отделяемое мочеполовых органов, прямой кишки или конъюнктивы глаз (при бленорее), суставной и перитонеальный экссудат. Строго регламентированными методами лабораторной диагностики гонореи являются микроскопическое и бактериологическое (культуральное) исследование. Методы микробиологической диагностики гонореи отражены в схеме 18 .

Схема 18. Методы микробиологической диагностики гонореи

Исследуемый материал: гнойное отделяемое мочеполовых органов, прямой кишки или конъюнктивы глаз (при бленорее), суставной и перитонеальный экссудат.

Микроскопический метод – мазки, окрашенные по Граму и метиленовым синим

Бактериологический метод – посев на специальные сывороточные питательные среды с антибиотиками. Через 24-72 часа культивирования учет характера роста (колонии в виде «росы»), пересев типичных колоний на сывороточный МПА и идентификация культуры по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, тест на оксидазу и антибиотикорезистентность

Серологический метод - РСК, ИФА строго не регламентированы, диагностического значения не имеют

Генодиагностика - ПЦР

Микроскопический метод заключается в исследовании мазков из исследуемого материала, окрашенных по Граму и метиленовым синим. При окрашивании препаратов на гонорею используют модификацию метода Грама (краситель генциан-виолет заменяют кристал-виолетом, а вместо фуксина применяют нейтральный красный; промывку препарата осуществляют после каждого этапа окраски). В мазках при острой гонорее обнаруживают большое количество полиморфноядерных лейкоцитов, внутри и вне которых расположены бобовидные грамотрицательные диплококки; сопутствующая микрофлора либо минимальна, либо отсутствует вовсе (рис. 25). При хронической гонорее в ряде случаев типичный гонококк в мазках не выявляется, либо выглядит нетипично в виде мелких пылевидных или крупных шарообразных образований, нередко 2 клетки гонококка располагаются под углом друг к другу, при этом обнаруживается обильная сопутствующая микрофлора, лейкоциты, эпителиальные и другие клетки. В качестве экспресс-метода диагностики может использоваться ИФМ.

Рис. 25. Возбудитель гонореи (Neisseria gonorrhoeaе) в мазках из уретры больного острой гонореей. Внутри и внеклеточно расположенные грамотрцательные диплококки, обилие лейкоцитов.

Бактериологический метод. Гонококк отличается высокой чувствительностью к различным неблагоприятным факторам, поэтому культуральное исследование необходимо проводить сразу после отбора материала. Посев производят на специальные питательные среды. Основой этих сред является МПА из кроличьего мяса с добавлением дрожжевого аутолизата, гидролизата казеина или гемогидрализата и сыворотки крупного рогатого скота. Асцитическая жидкость и яичный желток в качестве добавок к среде для культивирования гонококка в настоящее время не применяются. Второй тип питательных сред является селективным и включает в свой состав, помимо вышеуказанных компонентов, антибиотики (полимиксин, линкомицин, а для диагностики фарингеальной гонореи – оротовую кислоту). Посевы выращивают при 37⁰ С в течение 24-72 часов в атмосфере с повышенным содержанием СО₂. Колонии гонококков круглые, прозрачные, в виде капелек росы. Типичные для гонококков ко­лонии пересевают в пробирки со средой для культивирования гонококка для получения чистых культур, которые идентифицируют по морфологическим и сахаролитическим свойствам на средах "пестрого" ряда (полужид­кий агар с сывороткой и углеводом) или с помощью микро­тест-систем. В мазках из чистых культур гонококки располагаются не попарно, а отдельно. В биохимическом отношении гонококки малоактивны и ферментируют только глюкозу с обра­зованием кислоты, вырабатывают оксидазу. Для выявления оксидазы применяют пробу с 1% водным раствором диметилпарафенилендиамина или диэтилпарафенилендиамина, которые окрашивают колонии гонококка сначала в розовый, затем в красный, а через несколько минут – в черный цвет. Исследуют также чувствительность гонококков к антибиотикам и его бета-лактамазную активность.

Серологический метод (определение антител к гонококку в крови пациентов с помощью РСК и ИФА) не является строго регламентированным, не представляет диагностической ценности, не является методом контроля эффективности проводимого лечения и в реальной практике в настоящее время не используется.

Генодиагностика. Направлена на обнаружение специфических фрагментов ДНК гонококка с помощью ПЦР и может быть использована в качестве дополнительного высокоинформативного метода диагностики гонореи.