Самостоятельная работа студентов

1. Выявление антител к ВИЧ методом ИФА (демонстрация, положительная реакция характеризуется окрашиванием содержимого лунки в коричневый цвет).

2. Определение антител к ВИЧ с помощью иммуноблоттинга (демонстрация, положительная реакция характеризуется окрашиванием зон, соответствующих антигенам ВИЧ p24, p31, gp41, gp120).

Вирусологическая диагностика парвовирусных инфекций

Парвовирусы (parvus — маленький) - простые по строению ДНК-геном­ные вирусы, входящие семейство Parvoviridae, насчитывают более 50 вирусов, из которых только один - парвовирус 5-19 вызывает заболевание у человека. Клинические проявления парвовирусной инфекции весьма разнообразны. Вирус вызывает патологию и гибель плода, воспалительную инфекцию матки, инфекционную эритему кожи (нередко с петехиальным синдромом), острые артропатии, васкулиты, тромбоцитопению, гемофагоцитарный синдром, транзиторный апластический криз, хроничес­кие инфекции у пациентов с иммунодефицитами, поражения сердца (миокардиты, аритмию сердечных сокращений, перикардиты), нервной системы (невралгические амиотрофии, нейропатии плечевого сплетения), гепатиты. В 20-50% случаев парвовирусные инфекции протекают бессимптомно. Выбор материала для исследования зависит от клинических проявлений парвовирусной инфекции. Во всех случаях исследуют сы­воротку крови.

Серологический метод во многих случаях является единственным лабораторным методом, позволяющим подтвердить диагноз парвовирусной инфекции. Для определения антител к парвовирусу классов IgM (появляются через 14 дней после инфицирования, показатель свежего инфицирования) и IgG (показатель защитного иммунитета) в парных сыворотках крови больных используется ИФА, а также иммуноблотинг, который позволяет установить давность инфекции, в частности, сроки инфицирования беременных (антитела к антигену VP2 появляются раньше, чем антител к антигену VP1).

Вирусологический метод для практических целей лабораторной диагностики малоприменим, т.к. в обыч­ных клеточных культурах парвовируса не культивируется. Вирус репродуцируется в очень низких титрах только в культурах клеток костного мозга человека, селезенки плода, пуповинной крови и культурах клеток периферической крови, стимулированных эритропоэтином. Идентифи­кацию парвовируса в культуре клеток осуществляют с помощью РИФ (с целью выявления спе­цифических антигенов) или более чувствительных методов генодиагностики (выявление вирусной ДНК с помощью ПЦР или ДНК-гибридизации). С помощью ПЦР удается выявить вирусную ДНК в сыворотке крови, мононуклеарных клетках периферийной крови, биоптатах синовиальной сум­ки и т.д. у больных, находящихся в инкубационном пери­оде и острой фазе инфекции.

Вирусологическая диагностика аренавирусных инфекций

Семейство аренавирусов представлено одним родом, который содержит около десяти антигенно родственных вирусов.

К семейству аренавирусов относятся возбудители лимфоцитарного хориоменингита (вирус ЛХМ), лихорадки Ласса, боливийской геморрагической лихорадки (вирус Мачупо), аргентинской геморрагической лихорадки (вирус Хунин).

Морфологически аренавирусы полиморфны, однако основная форма круглая, диаметр вириона 110-130 нм. Геном аренавирусов состоит из 5 фрагментов и представлен одноцепочечной РНК. Внутри вирусных частиц обнаружены характерные зернистые структуры, напоминающие песчаные вкрапления (arena – песок). Снаружи вирусы покрыты плотной оболочкой с асимметрично расположенными поверхностными отростками булавовидной формы. Аренавирусы размножаются в курином эмбрионе, в организме различных грызунов наличного возраста в зависимости от вида аренавируса, а также в культуре клеток.

Лимфоцитарный хориоменингит – распространен повсеместно, являясь зоонозной инфекцией. Основной хозяин вирусов – дикие грызуны (серые мыши, хомячки, полевки). Человек заражается от животных аэрозольным, алиментарным путями, а также при укусах кровососущих насекомых (клещей). Инкубационный период 6-7 дней. Заболевание протекает по типу гриппа с поражением капилляров, кровоизлияниями, сопровождаясь лейко- и тромбоцитопенией. Возможен асептический менингит или менингоэнцефалит. Прогноз благоприятный.

Лихорадка Ласса – эндемичная инфекция к югу от Сахары. Основной резервуар инфекции – многососковая крыса, выделяющая вирус с мочой. Вирус передается путем контакта больных и здоровых лиц, от животных аэрогенным, алиментарным путями, что обеспечивает высокий риск заражения медицинского персонала больниц, а также семейных вспышек. Инкубационный период 7-8 дней, иногда до 20 дней. Начало заболевания постепенное (интоксикация, геморрагический синдром, язвенный фарингит, желудочные боли, отек лица и шеи, выпот в плевральную полость и в перикард). Летальность 43-67%.

Боливийская геморрагическая лихорадка (Мачупо) – природно-очаговая инфекция северно-восточных провинций Боливии. Резервуар инфекции мышевидные грызуны. Возбудитель передается человеку через воду и пищу, загрязненные мочой грызунов, а также воздушно-капельным путем от больного. Инкубационный период 7-14 дней. Характерен геморрагический синдром, дрожание конечностей и языка, протеинурия, поражение печени, выпадение волос и ломкость ногтей. Летальность свыше 30%.

Аргентинская геморрагическая лихорадка (Хунин)встречается в центральной части Аргентины. Источник инфекции – мышевидные грызуны. Человек заражается при вдыхании пыли или при употреблении продуктов, зараженных выделениями грызунов. Возможен трансмиссивный путь передачи инфекции. Заболевание протекает на фоне высокой интоксикации, с геморрагическим синдромом, поражениями почек печени, нервной и сердечно-сосудистой системы. Летальность 10-20%.

Вирусологическая диагностикааренавирусных инфекций основана на выделении вирусов путем заражения культуры клеток (клеткиVero, амниона человека, эмбриона мышей) с последующей идентификацией в РСК, реакциях нейтрализации или непрямой иммунофлюоресценции. Возможна постановка биопробы (используют белых мышей, морских свинок, обезьян). Серологические методы диагностики (РСК, РНГА) предполагают определение антител к соответствующим аренавирусам и служат целям ретроспективной диагностики. Разработана ПЦР.

Лечение и профилактика. Единственным эффективным методом лечения лихорадки Ласса является применение сыворотки от переболевших или иммунизированных лиц. Для профилактики лихорадки Ласса разработана вакцина.