Биологический и бактериологический метод.

Выделить чистую культуру возбудителя туляремии удается только методом биопробы.

1. день. Заражение морских свинок или белых мышей.

7-15 дни.Бактериоскопическое и бактериологическое исследование трупа животного. Мазки-отпечатки из внутренних органов, окраска по Романовскому-Гимзе, РИФ. Посев на глюкозо-цистиновый агар с кроличьей кровью и антибиотиками (на желточную среду или на среду МакКоя). Культивирование посевов при 37⁰С в течение 3-20 дней.

10-30 дни. Учет характера роста (нежные мелкие колонии). Микроскопическое исследование типичной колонии, ее пересев на скошенный глюкозо-цистиновый агар для выделения чистой культуры.

12-33 дни. Проверка чистоты выделенной культуры, пересев на среды «пестрого» ряда для определения ферментативных свойств, постановка проб на фаголизабельность и чувствительность к антибиотикам. Идентификация культуры по антигенным свойствам (выявление специфический антигенов с помощью РА и РИФ, ИФА).

14-35 дни. Заключение о виде выделенной культуры на основании ее идентификации по морфологическим, культуральным, ферментативным, антигенным свойствам и фаголизабельности.

Серологический метод

Постановка РНГА, РА, ИФА, с целью определения антител в крови больного

Аллергодиагностика

Постановка внутрикожной аллергической пробы с тулярином. Учет через 24-48 часов.

Биопроба

Подкожное, внутрибрюшинное, или пероральное заражение материалом от больного морских свинок или белых мышей. Микроскопическое и бактериологическое исследование трупов павших животных

Генодиагностика. ПЦР

а б

Рис. 9. Возбудитель туляремии (Francisella tularensis) в мазках из чистой культуры (а) и в мазках-отпечатках органов белой мыши (б), погибшей в результате биопробы. х630.

Рис. 10. Колонии возбудителя туляремии на глюкозо-цистеиновом агаре. х56

Генодиагностика. Для обнаружения ДНК возбудителя туляремии разработана ПЦР.

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопия демонстрационных микропрепаратов Francisella tularensis (окраска по Граму). Возбудитель туляремии представляет собой полиморфные мелкие бактерии кокковидной или палочковидной формы. Препараты зарисовать.

2. Серологический метод диагностики туляремии.

• РА с сывороткой крови больного туляремией и туляремийным диагностикумом (демонстрация, диагностичес­кий титр 1:100).

• РНГА с сывороткой крови больного туляремией и эритроцитарным туляремийным диагностикумом (демонстрация, диагностический титр 1:1280).

• ИФА с сывороткой крови больного туляремией (демонстрация, диагностичес­кий титр 1:100).

3. Специфическая профилактика туляремии: живая вакцина (вы­сушенная живая культура вакцинного штамма туляремии).

Микробиологическая диагностика сибирской язвы

Основным источником инфекции являются больные травоядные животные, от которых человек заражается при непосредственном контакте, алиментарным, аэрогенным или трансмиссивным путями. Чаще всего возникает кожная форма инфекции с образованием характерного сибиреязвенного карбункула в виде уголька (anthrax), реже – кишечная, легочная, септическая формы. Методы микробиологической диагностики сибирской язвы отражены в схеме 6.

Схема 6. Микробиологическая диагностика сибирской язвы

Материал: отделяемое карбункула или язвы, испражнения, моча, мокрота, кровь