Микроскопический метод.

Темнопольная микроскопия материала в препаратах «раздавленной капли». Выявление тонких спиралевидных микроорганизмов с концами в виде букв С или S, обладающих поступательным, вращательным, сгибательным движением

Бактериологический метод.

1. день.Посев на жидкие сывороточные питательные среды (Ферворта-Вольфа, Терских и др.) Культивирование посевов при 25-28⁰С в течение 10 дней и более. Лептоспиры не вызывают изменений внешнего вида среды. Их наличие в среде определяют темнопольной микроскопией. Идентификация по антигенным свойствам с помощью РА

Биопроба

Внутрибрюшинное заражение материалом от больного морских свинок или хомячков. Микроскопическое и бактериологическое исследование трупов павших животных

Серологический метод

Постановка реакции микроагглютинации и лизиса лептоспир (РМАЛ) РИФ, ИФА, РНГА с целью определения антител в крови больного

Генодиагностика. ПЦР

Бактериологический метод. Для выделения лептоспир применяют жидкие питательные среды (Ферворта-Вольфа, Терских и др.), в состав которых входит инактивированная кроличья сыворотка. Лептоспиры растут медленно (до 10 дней и более), не изменяя внешнего вида среды. Наличие лептоспир в среде подтверждается с помощью метода темнопольной микроскопии.

Биопроба. Ставится на морских свинках или золотистых хомячках. При наличии в материале лептоспиры серовара icterohaemorrhagiae у морских свинок через 5-10 дней появляется желтушная окраска склер и слизистых оболочек и через 48 часов после этого животные погибают. В моче и крови при микроскопии обнаруживают лептоспиры. Хомячки погибают в течение первых дней или месяца. С целью обнаружения лептоспир у зараженных животных проводится темнопольная микроскопия, а также посевы крови и ткани почек для выделения культуры лептоспир.

Серологический метод - постановка реакции микроагглютинации и лизиса лептоспир (РМАЛ - диагностический титр 1:10), РИФ, ИФА, РНГА с целью выявления специфических антител в крови больных.

Генодиагностика – разработана ПЦР для определения специфических фрагментов ДНК лептоспир.

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопическое исследование морфологии возбудителя лептоспироза - Leptospira interrogans методом темнопольной микроскопии. Обратить внимание на характерную морфологию (тонкие спиралевидные микроорганизмы с концами в виде букв С или S, обладающие поступательным, вращательным, сгибательным движением).

2. Знакомство с питательными средами для выращивания лептоспир (среды Ферворта-Вольфа, Терских)

3. Учет РНГА и ИФА, поставленных с сыворотками крови больных с подозрением на лептоспироз.

4. Знакомоство с биопрепаратами для профилактики и лечения лептоспироза.

• лептоспирозная вакцина - для профилактики заболевания, содержит культуры убитых нагреванием лептоспир.

• Лептоспирозный иммуноглобулин, полученный из сыворотки крови животных, иммунизированных убитыми лептоспирами.

Микробиологическая диагностика боррелиозов (возвратные тифы, болезнь Лайма)

Возбудителями боррелиозов являются Borrelia recurrentis (возбудитель эпидемического вшивого возвратного тифа, в настоящее время в России не регистрируется), Borrelia dutton, Borrelia persica, Borrelia sogdianum и др. (возбудители африканского и среднеазиатского эндемических клещевых возвратных тифов), а также Borrelia burgdorferi, Borrelia garini, Borrelia afzellii – возбудители клещевого боррелиоза (болезни Лайма). Возвратные тифы характеризуются развитием возвратной лихорадки, болезнь Лайма в начальной стадии – поражением кожи в виде мигрирующей эритемы, позднее – поражением сердца, опорно-двигательного аппарата, нервной системы и кожи. Исследуемым материалом является кровь. Для диагностики боррелиозов применяются следующие методы.

Микроскопический метод – исследование мазков крови и толстой кровяной капли, окрашенных по Романовскому-Гимза. Боррелии – извитые лилового цвета микроорганизмы, образующие до 9 крупных неравномерных завит­ков. При болезни Лайма микроскопический метод не применяется, т.к. в периферической крови возбудитель не обнаруживается.

Бактериологический метод. Боррелии удается культивировать на специальной среде (BSK-11), однако в реальной практике метод не используется.

Серологическое исследование. Является основным методом лабораторной диагностики при болезни Лайма. Для определения антител к Borrelia burgdoferi применяется метод иммунофлюоресценции, ИФА.