Педиатрические аспекты темы

1. Внутриутробная инфекция, пути заражения плода.

2. Особенности инфекционного процесса в организме плода, у новорожденных и детей раннего возраста.

Тема 13. Учение об иммунитете. Виды иммунитета. Неспецифическая резистентность. Серологические реакции

Цель занятия: знакомство с факторами неспецифической резистентности организма, видами и свойствами антигенов, практическим применением реакции агглютинации и реакции непрямой гемагглютинации в диагностике инфекционных болезней.

Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1. Иммунология, ее предмет и задачи. Основные этапы развития учения об иммунитете. Имму­нитет, его виды и формы.

2. Неспецифическая резистентность и ее механизмы. Факторы неспецифической резистентности.

3. Гуморальные факторы неспецифической резистентности. Система комплемента, пути его актива­ции.

4. Фагоцитоз. Фагоцитирующие клетки. Основные стадии фагоцитоза и их характеристики. За­вершенный и незавершенный фагоцитоз. Опсонины.

5. Антигены и их свойства. Полноценные и неполноценные антигены. Химическая природа антигенов, их структура и свойства.

6. Антигены млекопитающих (антигены групп крови, аутоантигены, эмбриоспецифические, опухолевые, трансплантационные антигены человека. Главный комплекс гистосовместимости, антигены гис­тосовместимости I и II классов).

7. Антигенная структура грамположительных и грамотрицательных бактерий, их локализация, химический состав.

8. Общая характеристика реакций антиген-антитело, стадии, механизмы. Серологический ме­тод диагностики.

9. Реакция агглютинации (РА). Механизмы, диагностическое значение. Реакция непрямой ге­магглютинации (РНГА) и коагглютинации. Агглютинирующие сыворотки и диагностикумы.

Самостоятельная работа студентов

1. Продолжение работы по идентификации культуры, выделенной из органов зараженного животного в результате биопро­бы:

• отбор колонии на плас­тинчатом МПА для последующего исследования;

• характеристика свойств коло­нии по следующим критериям: величина, цвет, форма, характер края и поверхности, структура;

• изготовление микропрепарата, окраска его по Граму, микроскопия;

• учет биохимической активности выделенного возбуди­теля,

• постановка ориентировочной реакции агглютинации на стекле с агглютинирующими сыворотка­ми S.enteritidis, S.choleraesuis, S. typhimurium: по 1 капле соот­ветствующих сывороток в разведении 1:10 на­носят пастеровской пипеткой на предметное стекло; капля физиологи­ческого раствора используется для контроля. В каждую каплю вносят петлей небольшое количество культуры и эмульгируют ее. Через несколь­ко минут в одной из капель образуются хлопья – агглютинация. Контрольная капля и капли с сыворотками, где результат отрицательный, остаются мутными. На основании результатов опыта сделать заключение о виде выделенного воз­будителя.

2. Постановка и учет развернутой реакции агглютинации с сывороткой крови больного при подозрении на бруцеллез (I4 день заболевания).

Компоненты реакции: сыворотка больного в разведении 1:25, бруцеллезный диагностикум (взвесь убитых бруцелл), физио­логический раствор.

Реакцию ставят по следующей схеме (табл. 10):

Таблица 10

Постановка развернутой реакции агглютинации

Компоненты реакции	Разведения сыворотки				КД	КПС
	1:25	1:50	1:100	1:200
Физиологический раствор	-	1,0	1,0	1,0	1,0	-
Исследуемая сыворотка	1,0	1,0	1,0	1,0	-	1,0
Диагностикум	2 капли	2 капли	2 капли	2 капли	2 капли	2 капли

КД – контроль диагностикума, КПС – контроль положительной сыворотки

Пробирки инкубируются в термостате при 37⁰ С в течение 2 часов, 18-20 часов при комнатной температуре. В положительном случае на дне пробирки выпа­дает осадок в виде «зонтика». Титр антител определяют по наи­большему разведению сыворотки, при котором наблюдается образование агглютината. Диагностический титр антител при бруцеллезе - 1:100.

3. Определение фагоцитарной активности нейтрофилов (завершенный фагоцитоз стафилококка) – рис. 13. В пробирку помещают 0,1 мл 2% раствора лимоннокислого натрия, 0,2 мл исследуемой крови, 0,1 мл взвеси тест - культуры стафилококка (концентрация 400 млн. микробных тел в I мл ), содержимое пробирки тщательно перемешивают и помещают в термостат при 37°С на 30 мин. Затем пробирки центрифугируют и из сероватой пленки на границе плазмы и эритроцитов гото­вят мазки, которые фиксируют в смеси Никифорова и окрашивают по Романовскому-Гимза. Микроскопируют с использованием иммерсионной системы. Определяют фагоцитарную активность лейкоцитов (ФА - процент фагоцитирующих клеток при подсчете 100 фагоцитов) и фагоцитарный показатель (ФП - число микробов, погло­щенных одним лейкоцитом). У здоровых лиц ФП составля­ет 5-9, ФА - 50 – 70%.

4. Изучение незавершенного фагоцитоз гонококка (микроскопия демонстрационного микропрепарата, приготовленного из гнойного отделяемого уретры больного гоно­реей) - рис. 14. Зарисовать разрушенные лейкоциты с непереваренными гонококками.

5. Учет реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с сывороткой крови больного при подозрении на носительство брюшнотифозного микроба - демонстрация. РНГА используется для выявления антител в крови больного или для идентификации неизвестного возбудителя по антигенам в патологическом материале. Соответственно исполь­зуют коммерческие эритроцитарные диагностикумы из эритроцитов, нагруженных антигенами или антителами. В данном случае исполь­зуется антигенный Vi – эритроцитарный брюшнотифозный диагностикум.

Рис. 13. Завершенный фагоцитоз стафилококка

Рис. 14. Незавершенный фагоцитоз гонококка

Ход реакции: в лунках пластмассовых пластин готовят разведения сыворотки больного от 1:25 до 1:200 в объеме 0,5 мл, в каждую лунку вносят по 2 капли эритроцитарного диагностикума, инкубируют при 37⁰С в течение 2 часов. Положительная реакция характеризуется образованием на дне лунки осадка с неровным краем в виде «зонтика» или «розетки», при отрицательном результате выпадает осадок в виде «пуговки» Диагностический титр 1:100. Контроли – КПС (контроль положительной сыворотки - эритроцитарный диагностикум + сыворотка, содержащая антитела к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа + физиологический раствор); КД – (контроль диагностикума - эритроцитар­ный диагностикум + физиологический раствор, гемагглютинации не наблюдается).