Самостоятельная работа студентов

1. Изучить основные этапы выделения чистой культуры шигелл. Учесть посевы на среды Плоскирева, Левина, Олькеницкого (демонстрация). Отметить наличие лактозоотрицательных бесцветных колоний на средах Плоскирева, Левина.

2. Провести контроль чистоты выделенной культуры шигелл. Со среды Олькеницкого приготовить мазок, окрасить его по Граму и промикроскопировать. Промикроскопировать и зарисовать де­монстрационные препараты возбудителей дизентерии Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.sonnei - грамотрицательные палочки с закругленными краями;

3. Идентификация выделенной культуры шигелл:

• по антигенным свойствам – постановка и учет РА на стекле со смесью видовых агглютинирующих сывороток Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh. sonnei и культу­рой, выделенной на среде Олькенипкого. Учет РА на стекле с видовыми дизентерийными сыворотками;

• по ферментативным свойствам - учет биохимической активности и фаголизабельности выделенной культуры шигелл, (демонстрация).

4. Колициногенотипирование. Учесть пробу по определению колициногенотипа выделенной культуры (демонстрация). Техника постановки описана в разделе «Генетика микроорганизмов».

5. Определение чувствительности выделенной культуры к анти­биотикам методом бумажных дисков (демонстрация).

6. Изучить биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики бактериальной дизентерии и холеры:

• агглютинирующие адсорбированные сыворотки к шигеллам Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii, Sh.sonnei. Используются для постановки реакции агглютинации при идентификации шигелл.

• дизентерийный бактериофаг таблетированный. Используется для профилактики и лечения дизентерии.

• диагностикумы эритроцитарные из шигелл Флекснера и Зонне. Используются для постановки РНГА при серодиагностике ди­зентерии.

• вакцина дизентерийная ШИГЕЛЛВАК, из липополисахарида шигелл Зонне.

Микробиологическая диагностика холеры

Холера — особо опасное, карантинное инфекционное заболевание, вызываемое Vibrio cholerae биоваров cholerae и eltor, проявляющееся в виде острого гастроэнтерита с выраженной интоксикацией и обезвоживанием (эксикозом) в результате нарушения водно-электро­литного обмена, cвязанного с выработкой вибрионами холерного энтеротоксина (холерогена).

Основной метод лабораторной диагностики холеры – бактериологический.

При выполнении исследований на холеру необходимо строго соблюдать требования противоэпидемического режима. Материал для исследования на холеру собирают в стерильную посуду, не содержащую следов дезинфицирующих растворов, упаковывают и достав­ляют в лабораторию. Банки, пробирки должны быть герметично закрыты водонепроницаемыми пробками, которые заливают парафином, посуду обвязывают двойным слоем вощеной бумаги и обрабатывают дезинфицирующим раствором. В направ­лении указывают фамилию, инициалы, возраст больного, его домашний и служебный адрес, диагноз, даты начала болезни и госпитализации, дату и час взятия материала, а также фамилию и инициалы лица, направившего анализ. Банки и пробирки с материалом для исследования перекладывают ватой, помещают, в металлическую коробку, а затем в деревянный ящик, который пломбируют, надписывают «Верх, осторожно» и на служебном транспорте с сопровождающим лицом пересы­лают в лабораторию в течение 2 часов после взятия проб.

Исследования на холеру проводятся круглосуточно в специальной лаборатории медицинскими работниками, прошедшими подготовку по особо-опасным инфекциям. Методы, применяемые для микробиологической диагностики холеры, представлены в схеме 13.

Микроскопический метод (микроскопия окра­шенных мазков и препаратов «висячей капли» из мате­риала от больного) при холере в настоящее время не применяется в связи с низкой его информативностью. Разработаны методы экспресс-диагностики холеры (РИФ).

Бактериологический метод состоит из нескольких этапов.

Первый этап. Исследуемый материал засевают на щелочные (элективные) плотные питательные среды (щелочной агар Монсура – МПА с триптиказой, хлоридом на­трия, таурохолатом натрия, карбонатом натрия; TCBS - тиосульфат-цитрат-бромтимол-сахарозный агар; ще­лочной МПА) и жидкие среды обогащения (1% щелочная пептонная вода).

Второй этап проводится через 6 —8 ч от начала анализа. Выполняют пересев из верхней части 1-й среды накопления на плотные элективные питательные среды и на 2-ю среду накопления. При наличии на 1-й пептонной воде нежной голубоватой пленки из нее готовят мазок в окраске по Граму, в котором обнаруживают грамотрицательные изогнутые в виде «запятой» вибрионы, проверяют подвижность, ставят ОРА с холерны­ми сыворотками О-1, О-139 и RO, а также специфическую иммунофлюоресценцию.

Третий этап выполняется через 12— 14 ч от начала анализа. Производится пересев из верхней части 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучают и отбирают для исследования типичные для холерного вибриона колонии на плотных средах, засеянных нативным материалом.

С

Материал для исследования:испражнения, рвотные массы, желчь, труп­ный материал (отрезки кишечника, желчного пузыря), пищевые продукты, вода

хема 13. Микробиологическая диагностика холеры

Бактериологический метод

1 этап.Посев материалана щелочные среды (Монсура, TCBS, ще­лочной МПА, 1% щелочная пептонная вода -ПВ). Культивирование при 37⁰ С.

2 этап (через 6 —8 ч от начала анализа). Учет характера роста на ПВ (нежная голубоватая пленка), микроскопия мазков в окраске по Граму, проверка подвижности, РИФ. Пересев на плотные элективные питательные среды и на 2-ю среду накопления.

3 этап (через 12— 14 ч от начала анализа). Пересев из 2-й среды накопления на плотные элективные питательные среды. Изучение, отбор и пересев на селективные среды типичных для холерного вибриона колоний (прозрачные, круглые, диаметром 1—2 мм, гладкие, пло­ские, го­могенные, с ровными краями колонии, голубоватого цвета; на агаре TCBS ярко-желтые колонии на зеленом фоне среды; на сре­де Монсура — полупрозрачные бесцветные с темным центром) с плотных сред, засеянных нативным материалом.

4 этап. (через 18 —24 ч от начала анализа). Изучение и отбор типичных колоний на всех плотных средах, тест на оксидазу, ОРА с холерны­ми сыворотками О-1, О-139 и RO,РИФ; пересев на ще­лочной МПА, среду Ресселя (или Олькеницкого) для выделения чистой культуры. Предварительный положительный ответ при наличии положительной РА или РИФ в сочета­нии с типичными морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами выделенной культуры.

5 этап (через 24 —36 ч от начала анализа). Изучение характера роста на щелочном МПА, среде Ресселя (Олькеницкого) - расщепление сахарозы (покраснением среды в столбике без образования газа),отсутствие ферментации лактозы. Микроскопия мазков в окраске по Граму, тест на оксидазу, ОРА с холерными сыворотками (О-1, RO, Огава, Инаба, при отрицательном результате - с сывороткой О-139). При положительном результате ОРА с одной из сывороток - ответ о выделении холерного вибриона. Пересев с целью окончательной идентификации оксидазопопожительных культур по сокращенной или полной схемам.

6 этап(через 36-48 ч от начала анализа) - окончательная идентификация выделенных куль­тур, определение их чувствительности к антибиотикам, формулировка окончательного ответа