Педиатрические аспекты

Значение медицинской микробиологии в практической деятельности врача-педиатра.

Тема 2. Морфология микроорганизмов. Структура бактериальной клетки Самостоятельная работа студентов

1. Изучение клеточной стенки у дрожжей (Saccharomyces сerevisiae - демонстрационный препарат). Окраске мазка дрожжей концентрированным красителем предшествовал плазмолиз клеток в гипертоническом растворе NaCl и протрава танином. Клеточная стенка выглядит темным двуконтурным розовато-сирене­вым ободком вокруг светлой цитоплазмы.

2. Выявление включений волютина у дифтерийной палочки – Corynebacterium diphtheriae (окраска по Нейссеру) – рис.6.

Методика окраски:

• фиксированный мазок окрашивают в течение 2-3 мин раствором уксусно-кислого метиленового синего Нейссера, после чего промывают водой;

• обрабатывают раствором Люголя в течение 20-30 сек.;

• не промывая водой, препарат окрашивают раствором везувина в течение 10-15 сек.;

• мазок промывают, высушивают, микроскопируют. Клетки коринебактерий окрашены везувином в золотисто-коричневый цвет, зерна волютина - в темно-коричневый, почти черный.

Рис. 6. Corynebacterium diphtheriae (окраска по Нейссеру).

З. Бактериальный нуклеоид у сенной палочки (Bacillus subtilis - демонстрационный препарат). Окраска по Романовско­му - Гимза. Зернышки хроматина поли­морфные, рубиново-красного цвета; цитоплазма - лилово-синего цвета.

4. Выявление капсул у Klebsiella pneumonae. Окраска препарата по Гинсу-Бурри.

Методика окраски:

• на предметное стекло наносят каплю жидкой натуральной туши и небольшую каплю воды, в которой эмульгируют исследуемую культуру;

• уголком шлифованного стекла обе капли перемешивают и по поверхности предметного стекла плоскостью шлифованного угла делают мазок. После подсушивания мазок осторожно фиксируют в пламени спиртовки, окрашивают в течение 1-2 мин. разбавленным 1:3 фуксином Циля, высушивают и микроскопируют. При микроскопии фон препарата темно-бурый, клетки бактерий красные. Капсулы выглядят в виде бесцветных овалов вокруг крас­ных клеток бактерий (рис. 7).

5. Капсулы у пневмококка (Streptococcus pneumoniae) в мазках-отпечатках органов зараженной белой мыши (демонстрационный препарат). Окраска по Граму. На фоне окрашенной ткани органа видны мелкие неокрашенные капсулы, внутри которых попарно (дип­лококки) или одиночно располагаются грамположительные ланцето­видные пневмококки.

Рис. 7. Klebsiella pneumonae. Капсулы в окраске по Гинсу-Бурри

6. Окраска кислотоустойчивых бактерий (возбудитель туберкулеза – Mycobacterium tuberculosis) Окраска по Цилю-Нильсену.

Методика окраски:

• на фиксированный мазок накладывают соответствующего формата листок фильтровальной бумаги, на которую наносят несколько капель карболового фуксина Циля;

• препарат нагревают над пламенем спиртовки 2-3 раза до появления паров, наблюдая сбоку, на уровне предметного стекла;

• препарату дают остыть, удаляют бумажку с фуксином, про­мывают мазок водой;

• обесцвечивают препарат 3% соляно-кислым спиртом до пре­кращения отхождения красных струек, промывают водой;

• докрашивают в течение 3-5 мин. раствором метиленового синего. Препарат промывают, высушивают, микроскопируют. Кис­лотоустойчивые туберкулезные микобактерии при микроскопии рубиново-красные, тонкие, но могут быть изогнутыми, ветвящи­мися, зернистыми. Другие элементы мокроты окрашиваются в синий цвет.

Рис. 8. Возбудитель туберкулеза – Mycobacterium tuberculosis. Окраска по Цилю-Нильсену.

7. Окраска спор Bacillus cereus. Окраска модифицированным методом Ауески. Выполняется окраска по методу Циля-Нильсена (см. предыдущий пункт 6), однако обесцвечивание проводится 0,5% HCl. Необходимо из­бегать грубой фиксации мазка над пламенем. Вегетативные клет­ки бактерий окрашиваются в голубой цвет, споры - в ярко-ма­линовый.

Все изученные препараты должны быть описаны и зарисованы.

После изучения темы студент должен знать: историю микробиологии, принципы классификации и номенклатуры микроорганизмов, морфологию и ультраструктуру бактериальной клетки и ее производных (капсулы, споры).

Изучив тему, студент должен уметь: готовить мазки из культур бактерий и окрашивать их с целью выявления кислотоустойчивых микроорганизмов, спор, капсул, включений волютина.