Микробиологическая диагностика эрлихиозов

Эрлихии (Ehrlichia chaffeensis, Ehrlichia phagocytophila, Ehrlichia equi, Ehrlichia sennetsu) поражают фагоциты (тканевые макрофаги, моноциты - Е. chqffeensis, гранулоциты - Е. phagocytophila ) животных и человека, вызывая острую трансмиссивную генерализованную инфекцию, сопровождающуюся лихорадкой, генерализованной лимфаденопатией, изменениями формулы крови и вторичным иммунодефицитом. При эрлихиозах, в отличие от других риккетсиозов, присасывание клеща не приводит к развитию первичного аффекта. Клиническая диагностика эрлихиозов затруднительна из-за отсутствия характерной симптоматики.

Лабораторная диагностика эрлихиоза включает следующие методы.

Микроскопический метод состоит в микроскопии мазков из крови больного, в которых при окраске по Романовскому—Гимзе компактные пурпурные скопления эрлихий (морулы) находятся в цитоплазме лей­коцитов в виде тутовой ягоды или малины.

Культуральный метод Культуральный метод более чувствителен, чем микроскопический. Возбудитель выделяют из крови путем длительного культивирования (до 4 недель) на перевиваемых куль­турах ткани (Vero, ТНР-1, HeLa или др.), которые систематически (2 раза в неделю) проверяются на присутствие эрлихий в мазках, окрашенных по Романовскому—Гимзе, с помощью ИФМ или ПЦР.

Генодиагностика заключается в постановке ПЦР, являющейся информативным методом выявления эрлихий.

Серологический метод являет­ся ретроспективным; для определения специфических антител к эрлихиям применяется непрямая РИФ и иммуноблотинг.

Микробиологическая диагностика бартонеллезов

Бартонеллы, в отличие от риккетсий, растут на искусственных пита­тельных средах. Бартонеллы поражают эндотелий сосудов и эритроциты, приводя к разви­тию ангиоматоза или анемии. У человека бартонеллы вызывают острые (волынская или окопная пятидневная лихорадка, возбудитель Bartonella quintana; болезнь Карриона или лихорадка Оройя с эндемическим распространением, возбудитель Bartonella bacilliformis), подострые (болезнь кошачьих царапин, возбудитель Bartonella henselae) и хронические (бациллярный ангиоматоз, перуанская бородав­ка, пурпурный гепатит, эндокардиты и др., возбудитель Bartonella bacilliformis) инфекции.

Микроскопический метод. Бартонеллы могут быть обнаружены в исследуемом материале от больного с помощью РИФ.

Бактериологический метод заключается в посеве крови от больного на специальные полужидкие и плотные питательные среды с гемином и 5-10% крови человека или животных (бара­на, кролика). Посевы выращивают при 37⁰ С (В. bacillifomis — при 21-30⁰ С) в атмосфере с 5-10% СО₂ в течение длительного времени (45-60 дней). Идентификацию бартонелл осуществляют на основании изучения морфологических (подвижность) и биохимических (наличие каталазы, оксидазы, нитратредуктазы и др.) свойств.

Серологический метод играет важную роль в постановке диагноза бартонеллеза. Для определения в крови больных антител к бартонеллам применяют ИФА, РНГА, РИФ.

Самостоятельная работа студентов

1. Микроскопический метод. Изучение морфологии риккетсий Провачека, Музера и Бернета (демонстрационные микропрепарата). Окраска по Романовскому-Гимзе. Препараты описать, зарисовать.

2. Методы культивирования риккетсий. Для культивирования риккетсий при­меняют развивающиеся куриные эмбрионы (РКЭ). Заражение проводят в желточный мешок. Риккетсии также можно культивировать в первично-трипсинизированных и перевиваемых тканевых культурах, а также в организме чувствительных лабораторных животных. Морских свинок заражают внутрибрюшинно, риккетсии накапливается в мезотелии оболочек яичка и вызывают специфический периорхит.

Морфологию выделенных риккетсий изучают в препаратах из со­держимого РКЭ и культур тканей, окрашивают по Романовскому-Гимзе или по Здродовскому. Применяется также иммунофлюоресцентный метод.

Для диагностики риккетсиозов в обычных лабораториях применяют серологический метод, а в клинике - кожные аллер­гические пробы.