Самостоятельная работа студентов.

1. Изучить питательные среды и аппараты, применяемые для культивирования патогенных анаэробов (демонстрация).

2. Морфологические свойст­ва Clostridium perfringens в чистой культуре (окраска по Граму, демонстрация – рис. 5). Зарисовать. Палочки крупные, грамположительные, образуют споры и капсулы.

3. Культуральные cвойства Clostridium perfringens на среде Китт- Тароцци, железо-сульфитном агаре (ЖСА) и молоке (демонстрация). В молоке через 3-4 часа образуется губкообразный сгусток, отде­лившаяся жидкость прозрачна. На среде Китт-Тароцци - помутнение, на ЖСА - черные колонии в глубине агарового столбика (рис. 3).

4. Ферментативная активность возбудителей анаэробной инфекции на средах Гисса. Обратить внимание на высокую фер­ментативную активность С.perfringens.

5. Лецитиназная активность Clostridium perfringens. Положительная реак­ция на лецитиназу проявляется в виде помутнения взвеси лецитина. При отрицательной реакции, которая наблюдается при нейтрализации фермента соответствующей антисывороткой, жидкость остается прозрачной. Демонстрацию описать, зарисовать.

6. Знакомство с препаратами для специфической профилактика и терапии газовой гангрены (антитоксические сыворотки моновалентные – против Clostridium perfringens, Clostridium novy, Clostridium oedematiens, Clostridium septicum и т.д., а также поливалентная, полученные при гипериммунизации лошадей).

Микробиологическая диагностика столбняка.

Для обнаружения столбнячной палочки обычно исследуют шовный и перевязочный материал, а в случае неясного течения болезни гной, кровь, кусочки тканей, выделения из матки, секционный материал. Выполняются следующие методы исследования:

Бактериоскопический метод. Не позволяет дать заключение о наличии клостридий столбняка в материале, поскольку в нем могут отсутствовать споры или находиться бактерии, сходные по морфологии с Clostridium tetani.

Бактериологический метод. Клиническая картина столбняка (высокая интоксикация, тонические и клонические судороги) весьма типична, поэтому бактериологическое исследование имеет ограниченное применение. Кроме того, бактериологический метод при столбняке не дает своевременных результатов. Это исследование проводят обычно при неясном течении болезни. Материал для исследования засевают на среду Китт-Тароцци, инкубируют при 37⁰ С в течение 3-4 суток, отмечая придонный рост бактерий. Пересевы осуществляют на сахарный МПА в чашке Петри и в пробирке с последующим выращиванием посевов в анаэростате. Нежные прозрачные колонии пересевают для получения чистой культуры на среду Китт-Тароцци, затем определяют морфологические (прямая палочка с шаровидной спорой на конце в виде барабанной палочки – рис. 6), биохимические свойства (характерна низ­кая ферментативная активность – табл. 5), токсинообразование.

Рис. 6. Палочка столбняка (Clostridium tetani). Окраска по Граму. Грамположительные спорообразующие бациллы, напоминающие барабанную палочку

Возможно выявление столбнячного токсина в исследуемом материале с помощью РНГА. С этой целью к исследуемому материалу добавляют эритроциты, нагружен­ные антителами к столбнячному токсину. Положительная реакция характеризуется выпадением эритроцитов с в виде осадка с фестончатыми краями.

Биопроба. Смесь исследуемого материала с антитоксической противостолбнячной сывороткой вводят внутримышечно белой мыши. Контролем служит мышь, которой вводят исследуемый материал без сыворотки. При наличии токсина у опытной мыши через 1-2 дня появляется ригидность мышц хвоста и задних конечностей, хвост принимает вид дуги и животное погибает. В опыте нейтрализации мышь выживает. В настоящее время в реальной практике биопроба не используется.