Микробиологическая диагностика бактериального вагиноза

Бактериальный вагиноз связан с перераспределением микрофлоры влагалища, в результате чего при этом заболевании на фоне подавления лактобактерий наблюдается массивный рост широкого спектра микроорганизмов (гарднерелл – Gardnerella vaginalis, пептококков, стрептококков, мобилункуса, бактероидов, микоплазм и др.). Диагностическое значение при этом заболевании является наличие не менее 3 из 4 признаков:

• характер вагинальных выделений (серовато-белого цвета, пенистых, с неприятным запахом);

• рН вагинального отделяемого >4,5;

• положительный аминный тест (рыбный запах), усиливающийся при смешивании патологического материала с 10% раствором КОН;

• выявление «ключевых» клеток (эпителиальные клетки, с адгезированными на них мелкими грамвариабельными палочками) при микроскопическом исследовании вагинальных мазков.

Лабораторная диагностика бактериального вагиноза основана на применении следующих методов.

Микроскопический метод – исследование влагалищных мазков, окрашенных по Граму и метиленовым синим с целью выявления «ключевых клеток» (рис. 28). В мазках, помимо гарднерелл, часто обнаруживаются также дрожжеподобные грибы рода Кандида, грамотрицательная микрофлора, мобилункус.

Бактериологический метод. Для выделения гарднерелл наиболее часто применяют колумбийский агар (панкреатический перевар казеина и тканей животных, дрожжевой экстракт, бычий экстракт, крахмал, NaCl) с 5% донорской крови и антибиотиками ( гентамицин, налидиксовая кислота, амфотерицин). Культивирование осуществляют в атмосфере 5-10% СО₂. Колонии гарднерелл через 48-72 часа культивирования гладкие, круглые, сероватые, блестящие, диаметром 0,1-0,5 мм с зоной β-гемолиза. В морфологическом отношении гарднереллы сначала грамотрицательные, затем грамвариабельные коккобактерии, ферментирующие различные углеводы, гиппурат, крахмал.

Генодиагностика. Разработана ПЦР для выявления специфических участков ДНК гарднерелл.

Другие методы лабораторной диагностики бактериального вагиноза (газожидкостная хроматография с целью определения летучих жирных и нелетучих органических кислот, а также хромато-масс-спектрометрия для анализа липидов гарднерелл) практического распространения не получили из-за высокой стоимости исследований и оборудования.

Рис. 28. Ключевые клетки во влагалищном мазке больной бактериальным вагинозом. Окраска метиленовым синим. х900

Самостоятельная работа студентов.

1. Микроскопическое исследование влагалищных мазков при бактериальном вагинозе (окраска по Граму, демонстрация). Обратить внимание на «ключевые» клетки (эпителиоциты, покрытые мелкими грамвариабельными коккобактериями на фоне отсутствия лактобактерий).

Тема 11. Возбудители риккетсиозов. Микробиологическая диагностика риккетсиозов

Риккетсиозы у человека и животных (12 нозологических форм) вызываются риккетсиями, подразделяющимися на 5 групп в зависи­мости от особенностей возбудителей и переносчиков:

I - группа сыпного тифа;

II - группа клещевых риккетсиозов;

III - группа лихорадки цуцугамуши;

IV - эрлихиозы человека и животных;

V - группа лихорадки Ку.

Риккетсии относятся к прокариотам, представляя собой мелкие полиморфные, грамотрицательные палочки, коккобактерии или нитевидные формы. Риккетсии являются облигатными паразитами, на искусственных питательных средах не растут и размножаются только в живой клетке. Риккетсии удается выделить путем заражения кровью больных риккетсиозами культур ткани (Vero, HeLa и др.), куриных эмбрионов, насекомых-переносчиков или экспериментальных животных. Наиболее часто в настоящее время используется метод культивирования риккетсий на культуре ткани. Выделение риккетсий проводится обычно с научными целями в специализированных лабораториях.

Культуральный метод. Исследуемый материал вносят в лунки пластиковых планшетов или пробирок с культурой ткани, инкубируют 48-72 часа при 34⁰ С в атмосфере 5 % СО_2, после чего клетки промывают, фиксируют и окра­шивают люминесцирующими сыворотками (прямая РИФ) против риккетсий для обнаружения возбудителя в клетках. Идентификацию выделенных риккетсий проводят также методом ПЦР.

Серологический метод является основным методом при лабораторной диагностике риккетсиозов. Его применяют с целью обнаружения антител к риккетсиям в крови больных с подозрением на риккетсиоз, используя РСК, РИФ, РА, ИФА, иммуноблотинг и другие иммунологические реакции.

Генодиагностика. В последнее время для диагностики риккетсиозов при­меняют метод ПЦР для детекции специфических фрагментов ДНК непосредственно в клиническом материале (кожные биоптаты, лимфоциты перифе­рической крови, ликвор, клетки эндотелия и др.).