Микробиологическая диагностика эпидемического сыпного тифа.

Возбудителем эпидемического сып­ного тифа и болезни Брилля-Цинссера (рецидивного сыпного тифа) является риккетсия Провачека (Rickettsia prowazekii), вызывающая у человека острое заболевание с внезапным началом, тифозным статусом (высокая температура тела, бред) и характерной сосудистой розеолезно-петехиальной сыпью в результате развития васкулита.

Культуральный метод - выделение риккетсий Провачека из крови больных или от насекомых-переносчиков - вшей путем заражения куриного эмбриона в желточный мешок, вшей или культур клеток связан с высоким риском лабораторного заражения и проводится в редких случаях в специальных лабораториях. Риккетсии можно обнаружить в ядре или цитоплазме инфицированных клеток микроскопическим методом при окраске по методу Романовского—Гимзе в виде полиморфных мелких микроорганизмов, окрашенных в пурпурно-фиолетовый цвет, а при окраске по Здродовскому — в ярко-красный. Обнаружить риккетсий в материале можно также с помощью РИФ (прямой вариант) и ПЦР.

Серологический метод диагностики с целью определения уровня сыпнотифозных антител и динамики их нарастания в сыворотке крови больных с подозрением на сыпной тиф является ведущим в лабораторной диагностике этой инфекции. Применяется РСК (диагностический титр 1:20), РА с диагностикумами из риккетсий Провачека (диагностический титр 1:160) , РНГА, непрямая РИФ. Диагностическое значение имеет 4-крат­ное нарастание титра антител в парных сыворотках. РСК позволяет диагностировать как активную форму болезни, так и перенесенную в прошлом (рет­роспективный диагноз), диффе­ренцировать эпидемический и эндемический (кры­синый) сыпной тиф, а также первичный сыпной тиф от бо­лезни Брилля - Цинссера (рецидива).

Микробиологическая диагностика эндемического сыпного тифа.

Возбудитель эндемического (кры­синого) сыпного тифа (Rickettsia typhi) вызывает заболевание, сходное по клиническим проявлениям с эпидемическим сыпным тифом, поэтому лабораторная дифференциация этих двух инфекций имеет важное значение для постановки точного диагноза и для целей эпидемиологии.

Серологический метод играет важную роль в дифференциации эндемиче­ского и эпидемического сыпного тифа. Применяются РСК и РА с антигенами из Rickettsia prowazekii и Rickettsia typhi. При эндемическом сыпном тифе титр сывороточных антител к Rickettsia typhi в 3-4 раза превосходит титр к Rickettsia prowazekii.

Биопроба. При отсутствии культуры ткани прово­дят внутрибрюшинное заражение кровью больных морских свинок-самцов. Появление скротальной реакции (периорхит), лихорадки и выявление рик­кетсий во влагалищных оболочках яичек подтверждает диагноз эндемического сыпного тифа.

Микробиологическая диагностика Ку-лихорадка.

Возбудитель Ку-лихорадки (Coxiella burnetii - рик­кетсии Бернета) вызывает острое (реже подострое или хроническое) инфекцион­ное заболевание с полиморфной клинической картиной. Для ла­бораторной диагностики этого риккетсиоза применяют серологический метод (РА, РСК), в некоторых случа­ях - непрямую РИФ, биологическую и кожно-аллергическую пробы.

Серологический метод является основным в лабораторной диагностике Ку-лихорадки. Серологические реакции (РА и РСК) для определения антител к Coxiella burnetii в парных пробах сыворотки крови больных Ку-лихорадкой ставят с антигенами I фазы (иммуногенный ЛПС) и II фазы (малоиммуногенный антиген) возбудителя. Диагностический титр 1:4.

Аллергодиагностика. Кожную аллергическую пробу проводят по обычной методике (0,1 мл аллергена внутрикожно), исполь­зуя в качестве аллергена растворимый антиген из риккетсий Бернета I фазы, автоклавированную культуру коксиелл или ЛПС I фазы. Результаты пробы учитывают через 24-48 ч по наличию и размерам инфильтрата, гипере­мии, отека. Проба специфична, но пригодна только для ретроспективной диагностики. У переболевших она оста­ется положительной в течение 10 лет.

Биопроба - внутрибрюшинное или интратестикулярное (в толщу яичек) заражение исследуемым материалом морских свинок самцов, куриных эмбрионов в желточный мешок. Обнаружение риккетсий осуществляется в мазках-отпечатках внутренних органов, окрашенных по Романовскому-Гимзе или Здродовскому. В настоящее биопроба в реальной практике не используется в связи с внедрением культур тканей для культивирования и выделения риккетсий.

Микробиологическая диагностика лихорадки цуцугамуши.

Лихорадка цуцугамуши вызывается Orientia tsutsugamushi и характеризуется лихорадкой, по­ражением нервной системы и органов кровообращения в результате развития множественных васкулитов.

Материалом для исследования служат кровь, взятая в период лихорадки, для выделения возбудителя, а также сыворотка крови для серологической диагно­стики.

Культуральный метод. Возбудитель лихорадки цуцугамуши в материале от больного можно выделить путем заражения перевиваемой культуры клеток L и на клетках первично-трипсинизированных фибробластов куриного эмбриона.

Серологический метод. Проводится со второй недели болезни. Для определения специфических антител в крови больных используют ИФА, РА (с антигеном из культуры Proteus mirabilis OXk), непрямую РИФ, РСК.

Биопроба. Кровью больного внутрибрюшинно заражают белых мышей, которые через 6-14 дней погибают. Риккетсии выявляют в мазках-отпе­чатках внутренних органов животного, окрашенных по Романовскому— Гимзе, Здродовскому или люминесцирующими сыворотками против Orientia tsutsugamushi.

. Микробиологическая диагностика риккетсиозов группы пятнистой лихорадки Скалистых гор.

К этой группе риккетсиозов относятся марсельская (Астраханская) лихорадка (возбудитель Rickettsia conorii), осповидный (везикулярный) риккетсиоз (возбудитель Rickettsia akari) пятнистая лихорадка Скалистых гор (возбудитель Rickeftsia rickettsii), клещевой сыпной тиф Сибири и Северной Азии (воз­будитель Rickettsia sibirica).

Биопроба – внутрибрюшинное заражение материалом от больного морских свинок самцов или белых мышей. Риккетсии этой группы вызывают у морских свинок через 6-14 дней после заражения скротальный феномен с некрозом мошонки, а у белых мышей (возбудитель везикулезного риккетсиоза) - перитонит.

Серологический метод. Для обнаружения антител в сыворотках крови боль­ных со 2 недели заболе­вания в динамике (исследование парных сывороток) используют непрямую РИФ, ИФА, РСК, РНГА. Нарастание титра антител в 4 и более раз в динамике болезни подтверждает диагноз риккетсиоза.